miR-200a通过介导ZEB1/2的表达来调控TGF-β1诱导的腹膜间皮细胞上皮间质转分化过程

发布时间：2023-07-27 07:17

　　目的:通过基因技术寻找到与腹膜透析相关性腹膜纤维化相关联的miRNA,体内及体外实验验证其表达变化,明确该miRNA是否参与到腹膜纤维过程。并通过RNA干扰技术,观察miRNA对腹膜纤维化关键环节腹膜间皮细胞间质转分化的影响。通过miRNA靶基因预测网站,筛选miR-200a下游作用靶基因,观察miR-200a对其调控作用,探讨miR-200a对腹膜间皮细胞EMT的调控机制。方法:1、体内实验:随机选取6只雄性SD大鼠,平均分为对照组及实验组。实验组:腹腔注射脂多糖(LPS)+高糖腹透液液,从而构建腹膜纤维化小鼠模型;对照组:腹腔注射生理盐水。通过基因芯片法检测小鼠腹膜组织miRNA相关表达谱,寻找相关差异表达的miRNAs。再通过扩大实验样本量,利用real time PCR法验证差异miRNA(miR-200a)表达水平是否与基因芯片结果相符。2、体外实验:利用转化生长因子β(TGF-β1)刺激腹膜间皮细胞,建立体外上皮细胞-间充质转分化(EMT)模型,分别用Western印迹、细胞免疫荧光、PCR等实验方法来检测人腹膜间皮细胞中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 前言
第2章 材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 配置实验所需溶液
        2.2.2 大鼠腹膜纤维化模型建立及检测
        2.2.3 细胞实验方法
        2.2.4 细胞转染
        2.2.5 实验分组
        2.2.6 western blot分析各处理组蛋白的相对表达量
        2.2.7 细胞免疫荧光分析蛋白的表达及定位
        2.2.8 RT- PCR检测各组m RNA的表达
        2.2.9 PCR检测各组miR-200a的表达
        2.2.10 统计学处理
第3章 结果
    3.1 大鼠模型的建立
    3.2 纤维化腹膜组织中miRNA表达谱变化
    3.3 建立体外EMT模型
    3.4 miR-200a在体外腹膜间皮细胞EMT过程中的表达
    3.5 miR-200a对EMT指标影响
    3.6 筛选miR-200a靶基因
    3.7 ZEB1/2 在体外腹膜间皮细胞EMT过程中的表达
    3.8 上调miR-200a对ZEB1/2 表达影响
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
综述 微小RNA与长期腹膜透析后腹膜纤维化的研究进展
    参考文献



本文编号：3837577