膀胱癌顺铂耐药与其基因甲基化相关性研究

发布时间：2024-02-24 03:13

　　目的： 通过了解顺铂耐药膀胱癌细胞中DNA甲基化谱的改变，探索与发生顺铂耐药密切相关的基因的甲基化及其蛋白表达的变化，为阐明膀胱癌化疗耐药机制提供新的实验依据。 方法： （1）顺铂耐药膀胱癌细胞株的建立：利用顺铂浓度梯度递增法(0.2-2.0mg/L)，在T24膀胱癌细胞中建立顺铂耐受的细胞株亚型（T24/DDP），并对细胞的各项生物学指标进行检测，包括顺铂敏感性、细胞形态学、细胞生长曲线及细胞周期等。 （2）顺铂耐药膀胱癌细胞DNA甲基化谱分析与耐药相关甲基化基因的筛选：DNA甲基化芯片对T24及T24/DDP细胞基因组的DNA甲基化谱进行分析，并通过统计学方法，筛选高甲基化，及低甲基化修饰基因。利用real time-PCR方法对筛选出的具有表达差异的甲基化修饰基因进行分析，并结合文献资料，最终采用MSP法，对筛选出的甲基化修饰基因进行进一步的验证分析。 （3）通过5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化了解顺铂耐药膀胱癌细胞生物学的作用；并对细胞生物学指标进行检测。 （4）采用5-氮杂-2-脱氧核苷去甲基化了解逆转顺铂耐药膀胱癌细胞的分子机制：利用real time-PCR及western...

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【部分图文】：

图1：MTT法检测T24，T24/DDP细胞对于DDP的敏感性

T法检测T24，T24/DDP细胞对于DDP的敏感性。取正常培养的T24及T24/DDP细DDP处理24小时，然后利用MTT法测定两种细胞的活力，计算DDP对其抑制率。T24/DDP细胞生长曲线和倍增时间(Td)T24/DDP细胞在正常的培....

图2：T24及T24/DDP细胞生长曲线

T法检测T24，T24/DDP细胞对于DDP的敏感性。取正常培养的T24及T24/DDP细DDP处理24小时，然后利用MTT法测定两种细胞的活力，计算DDP对其抑制率。T24/DDP细胞生长曲线和倍增时间(Td)T24/DDP细胞在正常的培....

图3：T24及T24/DDP细胞形态学比较

T24/DDP细胞形态学比较。（A）T24细胞；（B）T24/DDP细表1：T24及T24/DDP细胞周期分析G0/G1SG2/MT2446.6±5.226.5±2.523.9±4.3T24/DDP60.5±6.5*25.6±4.216.8±2.9**....

图4：T24与T24/DDP细胞总体甲基化谱比较

/DDP细胞中基因组DNA甲基化存在显著差异。图4显示为通过signalMap软件分析，2种细胞1号染色体上的甲基化谱。图4：T24与T24/DDP细胞总体甲基化谱比较按照PeakCount>2为初步筛选标准，T24/DDP细胞筛选出1120个甲基化差异位....

本文编号：3908430