HIF-2α调控巨噬细胞功能参与肾脏缺血再灌注损伤

发布时间：2024-03-16 03:00

　　目的:阐明巨噬细胞中敲除HIF-2α对肾脏缺血再灌注的影响及分子机制。方法:将Lyz-Cre+HIF-2αloxp/loxp和Lyz-Cre-HIF-2αloxp/loxp小鼠随机分为假手术组和实验组,并构建小鼠肾脏缺血再灌注模型。于再灌注后24h处死小鼠,检测血清中Cr和BUN含量。检测血清和肾脏中炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6及IL-10的表达水平。肾脏HE染色观察肾脏组织形态学改变。观察记录小鼠48h生存率。提取小鼠骨髓细胞并诱导分化为成熟的巨噬细胞,分为A组:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、21%O2 24h;B组:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、21%O2 24h;C组:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、15μM PFT-α、21%O2 24h;D组:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、15μM PFT-α、21%O2 24h;E组:HIF-2α+/+、LPS 100ng/ml、1%O2 24h;F组:HIF-2α-/-、LPS 100ng/ml、1%O2 24h;G组:HIF-2α+/+、LPS 100...

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【部分图文】：

图2-1HIF-2α巨噬细胞特异性敲除小鼠获取流程

上海翊圣生物科上海生工生物工程股HA标准剂盒验动物胞特异性HIF-2α敲除小鼠:HIF-2αloxp/loxp小鼠及Lyz-Cre(靶Jackson实验室引进。将HIF-2αloxp/loxp小鼠和Lyz-Cre小鼠过PCR对小鼠基因型进行鉴定，获得H....

图2-1基因型鉴定结果

TCAGTACGTGAGATATCTT,Cre-F:ACCTGAAGATGTTCGAGGCAGTATGCCTGGCTAATTCCAGTT,HIF-2α-P2:CTTCTGGGACT,HIF-2α-P3:GCTAACACTGTACTGTCTGAAAGA序：①94℃1min②94....

图2-3标准曲线制备流程

.5mlEP管中，匀浆器充分匀浆。匀浆液50白浓度。液及检测缓冲液至1×。前充分混匀，用1×检测缓冲液按1：100标记的链霉亲和素：稀释方法同上。液将血清样本进行2倍稀释；肾组织按50TNF-α检测为例）：用710μl蒸馏水重溶小分溶解混匀，重溶后标本品的浓....

图2-4各组小鼠生存率比较

图2-4各组小鼠生存率比较-2α：低氧诱导因子-2α；Sham：假手术组；IR：缺血再灌注模型组。清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平N和Cr水平是评价肾脏功能的重要指标。IR后24h于腹主动中BUN和Cr水平。结果如图2-5所示，与相应假手术组相比鼠....

本文编号：3929014