碱基切除修复基因功能变异、DNA氧化损伤与慢性肾功能衰竭的风险机制研究
发布时间：2024-03-30 21:04
作为遗传物质的DNA易受到机体内活性氧(reactive oxygen species, ROS)攻击造成氧化损伤,使生物体内基因变异积累并可能引发基因组的不稳定性,导致衰老、年龄相关性疾病(如神经退行性疾病和肿瘤)的发生。8-羟基鸟嘌呤(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)是最为常见的DNA氧化损伤产物之一研究中经常通过测定该产物水平来估测机体的氧化损伤程度。在DNA复制过程中8-OHdG倾向于与腺嘌呤(Adenine, A)而非胞嘧啶(Cytosine, C)配对,导致G:C→T:A的碱基颠换突变,是肿瘤、糖尿病等多种年龄相关性疾病的发病风险因素之一。 生物体内普遍存在针对于DNA损伤的修复系统。其中,碱基切除修复系统(base excision repair, BER)是针对DNA氧化损伤的主要修复途径。碱基切除修复系统是一个多步骤、涉及多种酶的过程,在人类,主要包括三种糖基化酶：MTH1(human MutT homolog-1)、OGG1(human8-OHdGuanine glycosylase)和MUTYH (human MutY hom...
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩写与中文对照
前言
参考文献
第一部分 碱基切除修复基因变异与中国人群慢性肾功能衰竭发病风险的研究
1.1 材料和方法
1.1.1 研究对象
1.1.2 主要仪器和试剂
1.1.3 外周血DNA提取
1.1.4 碱基切除修复基因变异的基因分型
1.1.4.1 引物设计
G变异基因分型"> 1.1.4.2 OGG1 c.977C>G变异基因分型
1.1.4.2.1 高分辨率熔解曲线
G变异进行基因分型"> 1.1.4.2.2 使用HRM对OGG1 c.977C>G变异进行基因分型
A变异基因分型"> 1.1.4.3 MTH1 c.247G>A变异基因分型
C变异基因分型"> 1.1.4.4 MUTYH c.972G>C变异基因分型
1.1.4.5 MUTYH基因AluYb8插入基因分型
1.1.5 基因变异位点基因分型样本测序验证
1.1.5.1 琼脂糖凝胶回收PCR产物
1.1.5.2 Bigdye反应
1.1.5.3 PCR产物沉淀
1.1.6 统计分析
1.2 结果
G变异基因分型结果"> 1.2.1 OGG1 c.977C>G变异基因分型结果
A变异基因分型结果"> 1.2.2 MTH1 c.247G>A变异基因分型结果
C变异基因分型结果"> 1.2.3 MUTYH c.972 G>C变异基因分型结果
1.2.4 AluYb8MUTYH变异基因分型结果
1.2.5 碱基切除修复基因变异联合分析与慢性肾功能衰竭发病风险
1.2.6 碱基切除修复基因变异与慢性肾功能衰竭患者原发疾病及并发症发病风险研究
第二部分 碱基切除修复基因变异与慢性肾功能衰竭患者DNA氧化损伤、慢性微炎症的研究
2.1 材料和方法
2.1.1 研究对象
2.1.2 主要仪器和试剂
2.1.3 外周血白细胞DNA中8-OHdG的含量测定
2.1.3.1 试剂配制
2.1.3.2 盐析法DNA提取
2.1.3.3 ELISA法检测基因组中8-OHdG含量
2.1.4 血浆中IL-1β的含量测定
2.1.5 血浆中IL-6的含量测定
2.1.6 统计分析
2.2 结果
2.2.1 慢性肾功能衰竭患者和对照组基因分型结果
2.2.2 外周血白细胞DNA中8-OHdG含量检测结果
2.2.3 IL-1β含量检测结果
2.2.4 IL-6含量检测结果
2.2.5 IL-1β、IL-6含量与碱基切除修复基因变异联合分析
2.3 讨论
参考文献
第三部分 MUTYH基因AluYb8插入变异影响原代培养成纤维细胞抗氧化应激能力的研究
3.1 材料和方法
3.1.1 研究对象
3.1.2 主要仪器和试剂
3.1.3 人脐带成纤维细胞的原代培养与鉴定
3.1.3.1 实验试剂的配制
3.1.3.2 人脐带成纤维细胞原代培养操作步骤
3.1.3.3 人脐带成纤维细胞原代培养的鉴定
3.1.3.4 原代培养人脐带成纤维细胞的AluYb8MUTYH基因型鉴定
3.1.3.4.1 基因组DNA提取
3.1.3.4.2 基因型鉴定
3.1.4 线粒体膜电位的检测
3.1.5 成纤维细胞线粒体拷贝数检测
3.1.6 细胞凋亡相关蛋白的表达
3.1.6.1 KBrO3处理后不同基因型成纤维细胞
3.1.6.2 蛋白提取与含量测定
3.1.6.3 免疫印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达
3.1.6.3.1 主要试剂配制
3.1.6.3.2 免疫印迹检测蛋白表达
3.1.7 统计分析
3.2 结果
3.2.1 人脐带成纤维细胞的原代培养与鉴定
3.2.1.1 人脐带成纤维细胞原代培养的鉴定
3.2.1.2 AluYb8MUTYH变异基因分型
3.2.2 线粒体膜电位的检测
3.2.3 线粒体拷贝数检测
3.2.4 细胞凋亡相关蛋白的表达
3.3 讨论
参考文献
第四部分 结论
文献综述
参考文献
发表论文
致谢
本文编号：3942937
【文章页数】：115 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
英文缩写与中文对照
前言
参考文献
第一部分 碱基切除修复基因变异与中国人群慢性肾功能衰竭发病风险的研究
1.1 材料和方法
1.1.1 研究对象
1.1.2 主要仪器和试剂
1.1.3 外周血DNA提取
1.1.4 碱基切除修复基因变异的基因分型
1.1.4.1 引物设计
G变异基因分型"> 1.1.4.2 OGG1 c.977C>G变异基因分型
1.1.4.2.1 高分辨率熔解曲线
G变异进行基因分型"> 1.1.4.2.2 使用HRM对OGG1 c.977C>G变异进行基因分型
A变异基因分型"> 1.1.4.3 MTH1 c.247G>A变异基因分型
C变异基因分型"> 1.1.4.4 MUTYH c.972G>C变异基因分型
1.1.4.5 MUTYH基因AluYb8插入基因分型
1.1.5 基因变异位点基因分型样本测序验证
1.1.5.1 琼脂糖凝胶回收PCR产物
1.1.5.2 Bigdye反应
1.1.5.3 PCR产物沉淀
1.1.6 统计分析
1.2 结果
G变异基因分型结果"> 1.2.1 OGG1 c.977C>G变异基因分型结果
A变异基因分型结果"> 1.2.2 MTH1 c.247G>A变异基因分型结果
C变异基因分型结果"> 1.2.3 MUTYH c.972 G>C变异基因分型结果
1.2.4 AluYb8MUTYH变异基因分型结果
1.2.5 碱基切除修复基因变异联合分析与慢性肾功能衰竭发病风险
1.2.6 碱基切除修复基因变异与慢性肾功能衰竭患者原发疾病及并发症发病风险研究
第二部分 碱基切除修复基因变异与慢性肾功能衰竭患者DNA氧化损伤、慢性微炎症的研究
2.1 材料和方法
2.1.1 研究对象
2.1.2 主要仪器和试剂
2.1.3 外周血白细胞DNA中8-OHdG的含量测定
2.1.3.1 试剂配制
2.1.3.2 盐析法DNA提取
2.1.3.3 ELISA法检测基因组中8-OHdG含量
2.1.4 血浆中IL-1β的含量测定
2.1.5 血浆中IL-6的含量测定
2.1.6 统计分析
2.2 结果
2.2.1 慢性肾功能衰竭患者和对照组基因分型结果
2.2.2 外周血白细胞DNA中8-OHdG含量检测结果
2.2.3 IL-1β含量检测结果
2.2.4 IL-6含量检测结果
2.2.5 IL-1β、IL-6含量与碱基切除修复基因变异联合分析
2.3 讨论
参考文献
第三部分 MUTYH基因AluYb8插入变异影响原代培养成纤维细胞抗氧化应激能力的研究
3.1 材料和方法
3.1.1 研究对象
3.1.2 主要仪器和试剂
3.1.3 人脐带成纤维细胞的原代培养与鉴定
3.1.3.1 实验试剂的配制
3.1.3.2 人脐带成纤维细胞原代培养操作步骤
3.1.3.3 人脐带成纤维细胞原代培养的鉴定
3.1.3.4 原代培养人脐带成纤维细胞的AluYb8MUTYH基因型鉴定
3.1.3.4.1 基因组DNA提取
3.1.3.4.2 基因型鉴定
3.1.4 线粒体膜电位的检测
3.1.5 成纤维细胞线粒体拷贝数检测
3.1.6 细胞凋亡相关蛋白的表达
3.1.6.1 KBrO3处理后不同基因型成纤维细胞
3.1.6.2 蛋白提取与含量测定
3.1.6.3 免疫印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达
3.1.6.3.1 主要试剂配制
3.1.6.3.2 免疫印迹检测蛋白表达
3.1.7 统计分析
3.2 结果
3.2.1 人脐带成纤维细胞的原代培养与鉴定
3.2.1.1 人脐带成纤维细胞原代培养的鉴定
3.2.1.2 AluYb8MUTYH变异基因分型
3.2.2 线粒体膜电位的检测
3.2.3 线粒体拷贝数检测
3.2.4 细胞凋亡相关蛋白的表达
3.3 讨论
参考文献
第四部分 结论
文献综述
参考文献
发表论文
致谢
本文编号：3942937
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/3942937.html
最近更新
教材专著
