Dnajb13在隐睾小鼠睾丸中的表达及其与生精细胞凋亡的关系

发布时间：2024-04-22 22:27

　　目的:通过分析热休克蛋白40家族成员Dnajb13在成年小鼠生精细胞中的定位,研究其mRNA和蛋白在隐睾小鼠睾丸中表达量和定位的变化情况,初步探讨其在生精细胞凋亡中的作用。方法:手术建立单侧隐睾小鼠模型,采用免疫组化方法研究Dnajb13在小鼠生精细胞中的定位;采用TUNEL、流式细胞检测结合形态学观察确认小鼠隐睾模型是否建立成功,并分析生精细胞凋亡情况;采用qPCR、Western印迹以及免疫组化分析隐睾手术后第1、2、3、4、6、9和15天与正常侧相比隐睾侧Dnajb13 mRNA和蛋白的表达及定位变化情况。结果:免疫组化结果显示在成熟小鼠正常睾丸组织中,Dnajb13表达于生精上皮周期Ⅸ～ⅩⅥ期长形精子中;成功构建隐睾小鼠模型。TUNEL结合流式细胞检测表明I期圆形精子以及分裂期初级精母细胞对温度升高最敏感,隐睾模型手术后最早发生凋亡的生精细胞是圆形精子细胞(Ⅰ～Ⅷ期),从17.09%降为6.52%(P<0.05),随后是变形期精子细胞(Ⅸ～ⅩⅥ期),最后为初级精母细胞;qPCR结果显示术后第3天Dnajb13 mRNA表达量轻微上升,约为正常侧的1.6倍(P<0.0...

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【部分图文】：

图1免疫组化检测DNAJB13在小鼠生精上皮中的表达模式(免疫组化,×100)

结果显示Dnajb13开始表达于Ⅸ期的S9期长形精子细胞胞质中,其蛋白表达量在S13～S14期的长形精子细胞中达到高峰,随后随着S15～S16期长形精子细胞甩脱胞质,Dnajb13在精子胞质内的表达量开始下降,最终只在S16期精子细胞残留的胞质小滴以及精子尾部还可以检测到Dnaj....

图2隐睾模型手术后小鼠睾丸外观、重量以及生精小管直径的变化

隐睾手术后第4天睾丸外观发生变化,第15天时显著缩小(图2A)。睾丸质量从术后第4天起开始下降,约为正常侧的0.8倍(P<0.05),到第9天只有正常侧的0.37倍(P<0.05),第9～15天内睾丸质量下降幅度变小,第15天的睾丸质量约为正常侧的0.31倍(图2B)。隐睾侧....

图3TUNEL检测隐睾小鼠睾丸组织

隐睾模型手术后处于不同发育阶段的生精细胞逐步发生凋亡,术后第1～3天TUNEL检测结果显示:Ⅰ阶段和Ⅻ阶段的生精小管内有部分圆形精子和少量分裂期初级精母细胞发生凋亡(图3B～D),流式细胞检测结果显示:单倍体精子细胞比例显著下降,从17.09%降为6.52%,差异显著(P<0....

图4隐睾手术后流式细胞检测生精细胞细胞DNA含量

图3TUNEL检测隐睾小鼠睾丸组织2.4Dnajb13mRNA在隐睾侧睾丸组织中的表达

本文编号：3962283