组织激肽释放酶7高表达前列腺癌PC-3单克隆细胞株的构建及其侵袭性研究

发布时间：2024-06-03 23:30

　　目的:构建重组人组织激肽释放酶7(KLK7)表达载体,建立稳定过表达KLK7的前列腺癌细胞株PC-3,并研究其细胞侵袭性。方法:将扩增后的KLK7cDNA克隆到表达载体pcDNA3.1上;使用限制性内切酶酶切后,DNA测序验证。然后,通过脂质体法转染人前列腺癌细胞株PC-3;选用G418进行筛选,并扩大培养每个单克隆细胞,进而建立稳定转染后的KLK7单克隆细胞株PC-3;Western blot检测目的蛋白的表达。通过细胞侵袭性试验了解其细胞侵袭性。结果:①通过酶切鉴定、DNA测序分析并证明,成功构建pcDNA3.1-KLK7表达载体;②成功获得稳定过表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株PC-3;③Western blot结果显示:经过pcDNA3.1-KLK7转染后的细胞与未转染的细胞表达量比较有统计学差异(P<0.01);④细胞侵袭性试验结果显示:转染后的细胞侵袭性高于未转染的细胞。结论:成功的建立pcDNA3.1-KLK7表达载体及稳定过表达KLK7的前列腺癌PC-3单克隆细胞株,同时证明其细胞侵袭性,为研究KLK7在前列腺癌发生、发展中的作用奠定了基础。

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

图1pcDNA3.1-KLK7结构及酶切位点位置示意图

取抽提后质粒实施酶切(KpnI限制性内切酶),载体构图(图1)。因KLK7开放读码框、pcDNA3.1载体上各存在1个酶切位点,因此酶切插入方向正确后电泳条带显示686bp(图2)。对预期相符质粒DNA测序验证。图2载体KpnI限制性内切酶酶切电泳图

图2载体KpnI限制性内切酶酶切电泳图

图1pcDNA3.1-KLK7结构及酶切位点位置示意图2PC-3稳定转染细胞株的KLK7表达鉴定

图3转染细胞及空载体细胞hK7表达比较

KLK7的细胞侵袭性试验结果表明(图3),40倍镜放大下5个随机视野,转染的PC-3-KLK7细胞组平均细胞计数为(246.60±23.41)个/HP,对照的PC-3细胞组平均细胞计数为(109.00±8.75)个/HP,两组比较差异具有统计学意义(P<0.01)(图4)。图4....

图4前列腺癌PC-3单克隆细胞株稳定过表达KLK7的细胞侵袭试验(结晶紫染色,×40倍)

图3转染细胞及空载体细胞hK7表达比较讨论

本文编号：3988545