生长抑制因子4对低氧诱导的人肾小管上皮间质转分化的作用及机制研究

发布时间：2025-01-17 16:50

　　目的:慢性肾脏病（Chroinc kidney disease,CKD）已经成为了危害人类健康的全世界公共卫生和健康问题。近年来,我国慢性肾脏病发病率呈现出上升的趋势。反复的检查和治疗不仅给患者增加了身体上的痛苦,更是带来了巨大的经济和心理上的压力,降低了生活质量。肾间质纤维化是公认的慢性肾脏病发展至终末期肾脏病的标志。以往研究已证实,肾小管上皮细胞-间质转分化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）,是促成肾间质纤维化（Renal interstitial fibrosis,RIF）进程的重要原因之一。EMT即参与机体正常的生长,也与很多疾病过程相关,在其中发挥了重要作用。如胚胎发育,慢性炎症疾病,组织重塑,癌细胞转移以及多种纤维化疾病。生长抑制因子家族（Inhibitor Of Growth Family Members,INGs）是一组抑癌基因,包括ING1^ING5这5个家族成员,其中生长抑制因子4（Inhibitor Of Growth Family Members,ING4）作为INGs的重要一员,对肿瘤细胞的生长、转...

【文章页数】：95 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :ING4与肾小管间质纤维化的关系研究
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器及设备
            2.1.4 主要试剂的配制
            2.1.5 引物的设计和合成
        2.2 实验方法
            2.2.1 建立动物模型
            2.2.2 HE染色
            2.2.3 Masson染色
            2.2.4 免疫组化染色
            2.2.5 q RT-PCR
            2.2.6 Western blot
            2.2.7 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 构建大鼠UUO模型
            3.1.1 HE染色检测大鼠肾组织病理学变化
            3.1.2 Masson染色检测大鼠肾组织纤维化情况
        3.2 大鼠UUO模型中EMT参与肾间质纤维化
        3.3 肾间质纤维化组织中HIF-1α表达升高,ING4 表达下降
            3.3.1 免疫组化法检测大鼠肾组织中的ING4和HIF-1α
            3.3.2 大鼠肾组织中ING4、HIF-1αm RNA转录水平
            3.3.3 大鼠肾组织中ING4、HIF-1α蛋白表达水平
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :ING4与低氧诱导的人肾小管上皮间质转分化的关系研究
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器及设备
            2.1.4 主要试剂的配制
            2.1.5 引物名称及序列
            2.1.6 ING4过表达质粒载体及序列
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞复苏
            2.2.2 细胞传代
            2.2.3 细胞计数
            2.2.4 细胞冻存
            2.2.5 MTT实验
            2.2.6 免疫荧光染色
            2.2.7 细胞转染
            2.2.8 q RT-PCR
            2.2.9 Western blot
            2.2.10 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 低氧促进肾小管上皮细胞间质转分化
            3.1.1 低氧条件下HK2细胞形态变化
            3.1.2 MTT检测细胞活力的变化
            3.1.3 HK2 细胞E-cad,N-cad和 vimentin蛋白表达水平
            3.1.4 免疫荧光检测HK2 细胞中N-cad表达
            3.1.5 HK2 细胞中collagen I和 collagen IV的 m RNA转录水平
        3.2 ING4参与低氧诱导的肾小管上皮细胞间质转分化
        3.3 过表达ING4 抑制EMT及肾间质纤维化
            3.3.1 ING4过表达质粒效果的验证
            3.3.2 过表达 ING4 对 HK2 细胞中 collagen I 和 collagen IV m RNA 水平的影响
            3.3.3 过表达 ING4 对 HK2 细胞中 E-cad、N-cad 和 vimentin 蛋白表达的影响
            3.3.4 过表达ING4对HK2 细胞中N-cad表达的影响
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :ING4抑制低氧诱导的肾小管上皮间质转分化的机制研究
    1 前言
    2 实验材料与方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞株
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器及设备
            2.1.4 主要试剂的配制
            2.1.5 引物名称及序列
            2.1.6 ING4过表达质粒载体及序列
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞转染
            2.2.2 细胞加药
            2.2.3 免疫荧光染色
            2.2.4 q RT-PCR
            2.2.5 Western blot
            2.2.6 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 过表达ING4对HK2中HIF-1α、Snail表达的影响
            3.1.1 HK2 细胞中HIF-1α、Snail的 m RNA转录水平
            3.1.2 HK2 细胞中HIF-1α、Snail的蛋白表达水平
            3.1.3 免疫荧光检测HK2 细胞中HIF-1α表达情况
        3.2 有或无HIF-1α激活剂时,过表达ING4对HK2 细胞collagen I和 collagenIV转录水平的影响
        3.3 有或无HIF-1α激活剂时,过表达ING4 对肾小管EMT的影响
    4 讨论
    5 结论
本研究自我创新性评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：4028284