姜黄素联合比卡鲁胺抑制MUC1-C信号通路对激素非依赖性前列腺癌的影响

发布时间：2017-05-30 02:14

  本文关键词：姜黄素联合比卡鲁胺抑制MUC1-C信号通路对激素非依赖性前列腺癌的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：本研究对前列腺癌激素非依赖性细胞进行药物干预及信号通路相关的实验,观察姜黄素对前列腺癌激素非依赖性细胞的作用,并探讨及联合给药的的作用机制。方法：1.采用MTT法检测细胞的抑制作用,对PC3、DU145、LNCaP细胞进行姜黄素单药药敏、姜黄素联合比卡鲁胺协同作用的试验观察其抑制效果。2.用姜黄素不同浓度以及在不同的时间点处理细胞,用Western blot法观察MAPK信号通路中SAPK/JNK、ERK1/2蛋白磷酸化的改变情况,同时检测目的蛋白MUC1-C、P65蛋白的表达情况。用姜黄素最佳的处理浓度单独及联合比卡鲁胺处理PC3、DU145细胞,用Western blot法观察SAPK/JNK、ERK1/2激酶蛋白分子的磷酸化改变情况以及目的蛋白MUC1-C、P65的表达情况。结果：1.MTT增殖抑制试验结果(1)姜黄素单独使用对激素依赖性细胞和激素非依赖性细胞都具有抑制作用。并呈现一定的时间依赖性和剂量依赖性。(2)姜黄素联合比卡鲁胺对激素依赖性细胞和激素非依赖性细胞的作用,对于单用比卡鲁胺而言,两者联用具有更强的抑制作用。2.姜黄素干预PC3、DU145细胞剂量依赖及时间依赖结果(1)姜黄素对PC3、DU145细胞进行干预的剂量依赖性实验中,MUC1-C、P65蛋白成剂量依赖的下降趋势,说明姜黄素对PC3细胞这两蛋白具有调节作用,且不同剂量之间的差异具有统计学意义(P0.05)。(2)姜黄素对PC3、DU145细胞时间依赖性实验中,p-SAPK/JNK及p-ERK1/2显示较好的时间相关性,在不同的点之间与空白组分析,差异具有统计学意义(P0.05)。3.姜黄素联合比卡鲁胺对激素非依赖性PC3、DU145细胞干预目的蛋白和蛋白激酶的变化(1)姜黄素对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.41±0.21,1.31±0.38,比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.01±0.24,1.02±0.1,姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.76±0.27,1.65±0.17,联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)姜黄素对DU145细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.29±0.11,1.54±0.3,比卡鲁胺对DU145细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.04±0.14,1.08±0.07,姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的p-SAPK/JNK及p-ERK1/2的灰度值分别为1.54±0.23,1.98±0.31,联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)姜黄素对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.5±0.03,0.49±0.07；比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.74±0.01,0.72±0.08；姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1一C及P65的灰度值分别为0.33±0.04,0.29±0.03；联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)姜黄素对DU145细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.48±0.07,0.46±0.09；比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.81±0.07,0.83±0.04；姜黄素联合比卡鲁胺对PC3细胞的MUC1-C及P65的灰度值分别为0.26±0.03,0.28±0.06；联合给药组与单药组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。4. SAPK/JNK抑制剂SP600125及ERKl/2抑制剂PD98059对激素非依赖性细胞PC3、DU145均具有作用,姜黄素作用后,添加激酶抑制剂,能够使MUC1-C及P65蛋白的蛋白表达量上调,且差异具有统计学意义(P0.05)。5.通过转染过表达质粒MUC1-C及P65,MTT测定其PC3、DU145细胞的抑制作用,结果显示差异具有显著性意义(P0.05)。转染过表达质粒后,测定MUC1-C、P65蛋白的表达情况,可以得出转染姜黄素干预后蛋白表达增多,差异具有统计学意义(P0.05)。6.通过转染MUC1-C过表达质粒,可以引起p-ERK1/2及SAPK/JNK的变化,转染后的细胞导致激酶蛋白的下降,其差异具有统计学意义(P0.05)。结论：1.姜黄素单独对PC3、DU145、LNCaP三种进行干预,均能抑制其增值。姜黄素联合比卡鲁胺对三种细胞的作用优于单药处理的作用,说明姜黄素对比卡鲁胺治疗激素非依赖性前列腺癌有增效增敏作用。2.姜黄素单独使用对PC3、DU145细胞的MUC1-C、P65蛋白的表达具有调节作用。姜黄素对p-SAPK/JNK及p-ERK1/2调节进而影响两种目的蛋白的表达。姜黄素联合康士得对PC3、DU145细胞干预后,对比两药单独给药组,对MUC4-C、P65蛋白的表达下降。在MAPK信号通路中,姜黄素联合比卡鲁胺对p-SAPK/JNK及p-ERK1/2蛋白正向调节作用优于姜黄素、比卡鲁胺单独使用组。在激素非依赖性前列腺癌对比卡鲁胺不敏感的基础上,联合姜黄素治疗激素非依赖性前列腺癌有一定的增敏作用。中药单体联合比卡鲁胺增强激素非依赖性前列腺癌的敏感性不止作用于一条或几条信号通路。肿瘤细胞的生长及凋亡涉及复杂的信号通路,我们需要进一步的研究,探讨MUC1-C蛋白与P65之间的关系。
【关键词】：姜黄素 比卡鲁胺 激素非依赖性前列腺癌 SAPK/JNK NF-Kb/p65 MUC1-C
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 引言9-11
• 文献研究11-17
• 第一章 材料与方法17-23
• 1.1 材料与方法17-18
• 1.2 仪器18
• 1.3 实验方法18-23
• 1.3.1 细胞的复苏、培养及冻存18-19
• 1.3.2 Count Star细胞计数19
• 1.3.3 药物对细胞增殖(MTT)实验19
• 1.3.4 姜黄素单独对PC3、DU145细胞的剂量依赖和时间依赖性实验19-20
• 1.3.5 姜黄素联合比卡鲁胺对目的蛋白、激酶的影响20
• 1.3.6 抑制剂对PC3、DU145细胞的影响20
• 1.3.7 蛋白提取方法20
• 1.3.8 Western blot方法检测20-21
• 1.3.9 过表达质粒提取方法21-22
• 1.3.10 过表达质粒转染方法22
• 1.3.11 统计学方法22-23
• 第二章 结果23-44
• 2.1 姜黄素联合比卡鲁胺对PC3、DU145、LNCAP细胞生长的影响23-27
• 2.1.1 姜黄素、比卡鲁胺能够抑制PC3、DU145、LNCaP细胞的增殖23-25
• 2.1.2 姜黄素联合比卡鲁胺能够抑制PC3、DU145、LNCaP细胞的增殖25-27
• 2.2 姜黄素对激素非依赖性细胞信号通路的探讨27-32
• 2.2.1 姜黄素对激素非依赖性PC3、DU145细胞SAPK/JNK、ERK1/2激酶磷酸化和蛋白表达的影响27-29
• 2.2.2 姜黄素对激素非依赖性PC3、DU145细胞的剂量依赖性,检测对MUC1-C、P65蛋白的影响29-30
• 2.2.3 姜黄素对激素非依赖性PC3、DU145细胞使用SAPK/JNK、ERK1/2激酶抑制剂后,对MUC1-C、P65蛋白的影响30-32
• 2.3 姜黄素联合比卡鲁胺对激素非依赖性细胞信号通路的探讨32-36
• 2.3.1 姜黄素联合比卡鲁胺对激素非依赖性PC3、DU145细胞SAPK/JNK、ERK1/2激酶磷酸化和蛋白表达的影响32-35
• 2.3.2 姜黄素联合比卡鲁胺对激素非依赖性PC3、DU145细胞的剂量依赖性,检测对MUC1-C、P65蛋白的影响35-36
• 2.4 MUC1-C、P65之间可能的相互调节作用36-42
• 2.4.1 姜黄素对转染过表达MUC1-C质粒以及过表达P65质粒后的PC3、DU145细胞生长的影响36-39
• 2.4.2 姜黄素对转染过表达MUC1-C质粒后的PC3、DU145细胞测定P65蛋白表达39-40
• 2.4.3 姜黄素对转染过表达P65质粒后的PC3、DU145细胞测定MUC1-C蛋白表达40-42
• 2.5 转染过表达MUC1-C质粒后,姜黄素对SAPK/JNK、ERK1/2磷酸化的表达水平42-44
• 第三章 讨论44-47
• 结语47-48
• 参考文献48-56
• 在读期间发表的论文及成果56-57
• 致谢57

【参考文献】

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1 刘双林;王志华;胡志全;曾星;李有元;苏耀武;章传华;叶章群;;Anti-tumor Activity of Curcumin against Androgen-independent Prostate Cancer Cells via Inhibition of NF-κB and AP-1 Pathway in vitro[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2011年04期

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本文编号：406191