靶向沉默膀胱癌T24细胞VEGF基因对DC分化成热及免疫功能的影响

发布时间：2017-06-09 08:12

  本文关键词：靶向沉默膀胱癌T24细胞VEGF基因对DC分化成热及免疫功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术,靶向沉默膀胱癌T24细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表达,通过将T24细胞培养上清与外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)来源的树突状细胞(Dendritic cells,DC)共培养,来模拟在膀胱癌微环境下,膀胱癌细胞分泌VEGF对DC细胞的发育成熟和免疫功能的影响。同时探讨膀胱癌微环境中的VEGF参与癌细胞免疫逃逸、影响DC抗肿瘤效应的机制,进一步为后续临床上制备DC疫苗治疗膀胱癌提供更全面的实验依据。方法:实验设置三个组,分别为:感染组、空载体组以及未感染组。构建针对VEGF基因的慢病毒干扰载体LV-VEGFA-RNAi以及无有效干扰序列的空载体慢病毒LV-CON(两种慢病毒载体均带有增强型绿色荧光蛋白),分别感染各组T24细胞,未感染组不采取任何干预措施。采用荧光显微镜观察感染组及空载体组细胞荧光表达情况,验证感染成功,使用倒置显微镜观察未感染组细胞生长情况。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量核酸扩增检测(q PCR)以及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测各组T24细胞VEGF m RNA和蛋白表达,并将各组T24细胞培养上清分别与未成熟DC(PBMC)共培养,采用流式细胞仪检测DC细胞分化成熟指标CD1a、CD83以及免疫功能指标CD86等。采用SPSS17.0软件对数据结果进行统计学分析。结果:慢病毒干扰载体成功感染膀胱癌T24细胞后对各组均产生了一定的损伤,感染组和空载体组均有一定比例的细胞死亡,可见细胞碎片。与未感染组相比,感染组膀胱癌T24细胞VEGF m RNA及蛋白的表达均受到显著抑制(P0.05),细胞生长变缓。与空载体组相比,感染组膀胱癌T24细胞VEGF m RNA及蛋白的表达亦受到明显抑制(P0.05),细胞生长亦明显变缓。而空载体与未感染组相比,T24细胞VEGF m RNA及蛋白的表达量差异不明显(P0.05)。各组膀胱癌T24细胞的培养上清液与未成熟DC共培养之后,感染组中反应DC分化成熟的表型CD1a、CD83及免疫功能表型CD86较未感染组有明显增高(P0.05),较空载体组亦有明显增高(P0.05),而空载体组与未感染组中反应DC分化成熟及免疫功能的表型无明显差异(P0.05)。结论:VEGF是肿瘤微环境中的一个极为重要的免疫抑制因子,而DC是目前发现的体内功能最强,唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞(Antigen-presenting cell,APC),也是肿瘤微环境中的主要抗原递呈细胞,在机体的抗肿瘤免疫反应中发挥极为重要的作用。本实验结果表明:膀胱癌T24细胞分泌VEGF,可抑制DC细胞的分化成熟以及免疫功能,这可能与膀胱癌的免疫逃避有关。通过RNAi技术可靶向沉默膀胱癌细胞的VEGF表达,有利于微环境中的DC细胞发育成熟及免疫功能的发挥,可能通过修复DC被损害的免疫监视功能,增加DC细胞的抗肿瘤能力。
【关键词】：膀胱癌 微环境 VEGF DC
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 英汉缩略词对照表3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-15
• 材料与方法15-28
• 结果28-46
• 讨论46-54
• 结论54
• 参考文献54-59
• 致谢59-60
• 非肌层浸润性膀胱癌诊治现状及进展（综述）60-72
• 参考文献67-72

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本文编号：434847