牛磺酸对高尿酸血症肾病大鼠尿酸排泄的影响

发布时间：2017-06-23 07:05

  本文关键词：牛磺酸对高尿酸血症肾病大鼠尿酸排泄的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：嘌呤代谢的紊乱会导致尿酸生成量增加,此作用或同时伴随肾脏尿酸排泄障碍使得血液中尿酸浓度升高,从而引发高尿酸血症。多数哺乳动物拥有尿酸酶,可将尿酸转换为尿囊素,并容易通过尿液排除,但人类由于缺乏尿酸酶,嘌呤代谢的最终产物仍是尿酸,就会因高水平的血尿酸引发高尿酸血症等疾病,进而导致尿酸盐在关节和肾脏中结晶沉积。有报道称牛磺酸(taurine, Tau, β-氨基乙磺酸)可影响肾脏的多种生理功能,并可保护多种原因引起的肾损伤,因此对此种具有广泛生物学功能的内源性含硫氨基酸类化合物进行研究十分必要。本实验室前期研究发现,牛磺酸对降低高尿酸血症肾病大鼠的肾脏损伤、减少尿酸生成及促进尿酸排泄有一定的作用,但相关机理研究还不太明确。本试验通过腺嘌呤(200mg/kg/d)和乙胺丁醇(250mg/kg/d)混合液灌胃SD大鼠制备高尿酸血症肾病模型,在饮水中分别添加1%、2%牛磺酸进行试验,旨在探索牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型尿酸排泄的影响及其机制。将大鼠随机分为6组：正常对照组、模型组、别嘌呤醇组、1%、2%牛磺酸处理组和2%牛磺酸对照组。牛磺酸处理组和别嘌呤醇组分别预饮牛磺酸和别嘌呤醇,正常对照组和模型组大鼠正常饮水,除正常对照组和2%牛磺酸对照组外,其他三组灌胃造模,连续10天。检测肾脏损伤情况、肾功能相关生化指标、NOS活性、NO水平、抗氧化能力以及尿酸盐代谢转运蛋白URAT1、UAT和MRP4基因m RNA及其蛋白的相对表达水平。试验结果表明：①牛磺酸可显著降低高尿酸血症肾病大鼠肾脏指数和病变积分(P0.05),接近对照组水平,显著降低血清尿酸(UA)、肌酐(Cr)和尿蛋白排泄水平,增加尿素氮(BUN)排泄(P0.05)；②牛磺酸可提高高尿酸血症肾病大鼠血清一氧化氮合酶(NOS)活性,恢复至正常水平(P0.05),对一氧化氮(NO)含量影响不显著,同时牛磺酸可显著提高高尿酸血症肾病大鼠总抗氧化能力(T-AOC) (P0.05),提高超氧化物歧化酶(SOD)活力,接近对照组水平(P0.05),降低血清丙二醛(MDA)含量(P0.05),接近对照组水平(P0.05)；③牛磺酸可显著增加高尿酸血症肾病模型大鼠肾脏UAT、MRP4基因及其蛋白表达水平(P0.05),下调URAT1基因,恢复URAT1蛋白表达水平趋于正常(P0.05)。综上所述,牛磺酸可预防大鼠高尿酸血症肾病,其作用可能是通过减轻肾脏功能损伤以及调节尿酸排泄相关转运蛋白基因的表达而发挥的。
【关键词】：牛磺酸 高尿酸血症 肾病 大鼠 尿酸
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.7;R692
【目录】：

• 中文摘要12-13
• 英文摘要13-15
• 前言15-24
• 1 高尿酸血症肾病概述15-21
• 1.1 高尿酸血症15-16
• 1.2 高尿酸血症肾病的发生机制16-20
• 1.3 治疗高尿酸血症肾病现有的方法20-21
• 2 牛磺酸概述21-23
• 2.1 牛磺酸及其作用21-22
• 2.2 牛磺酸与肾脏的关系及研究现状22-23
• 3 研究的目的和意义23-24
• 1 材料和方法24-42
• 1.1 试验材料24-26
• 1.1.1 试验动物24
• 1.1.2 日粮24
• 1.1.3 饲养管理24
• 1.1.4 试验药品及试剂24-25
• 1.1.5 主要仪器25-26
• 1.2 试验方法26-27
• 1.2.1 试验设计及动物模型的制备26-27
• 1.2.2 样本的采集及制备27
• 1.3 基本检测指标与方法27-30
• 1.3.1 大鼠临床表现观察27
• 1.3.2 肾脏指数的测定27
• 1.3.3 肾脏组织学检查27-30
• 1.3.4 图像分析30
• 1.4 肾脏功能相关的生化指标检测30-31
• 1.4.1 尿酸(UA)测定操作步骤30
• 1.4.2 尿素氮(BUN)测定操作步骤30
• 1.4.3 肌酐(Cr)测定操作步骤30-31
• 1.4.4 尿蛋白总量(Urine protein)测定操作步骤31
• 1.5 一氧化氮合酶及一氧化氮检测31-32
• 1.5.1 一氧化氮合酶(NOS)测定操作步骤31-32
• 1.5.2 一氧化氮(NO)测定操作步骤32
• 1.6 抗氧化能力检测32-33
• 1.6.1 总抗氧化能力(T-AOC)测定操作步骤32
• 1.6.2 超氧化物歧化酶(SOD)测定操作步骤32-33
• 1.6.3 丙二醛(MDA)测定操作步骤33
• 1.7 PCR法检测尿酸排泄相关基因表达33-36
• 1.7.1 引物的设计与合成33
• 1.7.2 肾脏组织总RNA的提取33-34
• 1.7.3 总RNA纯度分析34
• 1.7.4 总RNA的反转录34-35
• 1.7.5 PCR反应35
• 1.7.6 琼脂糖凝胶电泳35-36
• 1.7.7 测序36
• 1.8 大鼠URAT1、UAT、MRP4基因表达水平的荧光定量检测与分析36-37
• 1.8.1 RT-PCR退火温度的确定36
• 1.8.2 RT-PCR检测36-37
• 1.9 Western Blot检测大鼠URAT1、MRP4蛋白在肾脏中的表达37-42
• 1.9.1 大鼠肾脏总蛋白的提取37
• 1.9.2 Bradford法蛋白浓度的测定37-38
• 1.9.3 Western Blot检测38-41
• 1.9.4 数据处理及统计学分析41-42
• 2 结果42-54
• 2.1 临床表现观察42
• 2.2 肾脏病理解剖学变化42
• 2.3 大鼠肾组织光镜检查42-43
• 2.4 牛磺酸对大鼠肾脏指数及病变积分的影响43-45
• 2.5 牛磺酸对大鼠肾脏功能相关的生化指标的检测45-46
• 2.6 牛磺酸对一氧化氮合酶及一氧化氮的影响46-47
• 2.7 牛磺酸对抗氧化能力的影响47-48
• 2.8 PCR检测结果48-50
• 2.8.1 大鼠肾脏中总RNA的提取结果48-49
• 2.8.2 URAT1基因测序结果49
• 2.8.3 UAT基因测序结果49-50
• 2.8.4 MRP4基因测序结果50
• 2.9 URAT1、UAT、MRP4基因表达水平的荧光定量检测结果50-52
• 2.9.1 大鼠肾脏URAT1、UAT、MRP4实时荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线50-51
• 2.9.2 大鼠肾脏URAT1、UAT、MRP4相对表达量51-52
• 2.10 牛磺酸对大鼠肾脏尿酸排泄相关蛋白相对表达量的影响52-54
• 3 讨论54-60
• 3.1 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型肾脏结构和功能的影响54-55
• 3.1.1 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型肾脏结构的作用54
• 3.1.2 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型肾功能的作用探讨54-55
• 3.2 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型一氧化氮水平及抗氧化能力的影响55-57
• 3.2.1 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型一氧化氮水平探讨55-56
• 3.2.2 牛磺酸对大鼠高尿酸血症肾病模型抗氧化能力及氧化应激探讨56-57
• 3.3 牛磺酸对高尿酸血症肾病大鼠模型尿酸排泄相关基因的影响57-60
• 3.3.1 牛磺酸对尿酸盐阴离子转运体1(URAT1)的影响57-58
• 3.3.2 牛磺酸对尿酸转运蛋白(UAT)的影响58-59
• 3.3.3 牛磺酸对多药耐药蛋白4(MRP4)的影响59-60
• 结论60-61
• 参考文献61-65
• 附录65-67
• 致谢67-68
• 攻读学位论文期间发表文章68

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