利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白

发布时间：2017-06-26 22:02

  本文关键词：利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库中筛选与转录因子HOXA11相互作用的蛋白。方法:培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库。同时,聚合酶链反应扩增人HOXA11基因片段(1~846 bp),将此基因片段重组入p GBKT7载体,构建诱饵质粒p GBKT7-HOXA11,经酶切和测序验证质粒构建正确。将诱饵质粒转化酵母菌AH109,检测其有无毒性与自激活作用。随后,利用酵母双杂交系统从c DNA文库中筛选与HOXA11相互作用的蛋白。对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析。结果:成功构建了人肾透明细胞腺癌c DNA文库和p GBKT7-HOXA11诱饵质粒。在AH109酵母细胞中,该质粒无毒性、无自激活作用。酵母双杂交筛选获得了5个与HOXA11相互作用阳性克隆。结论:获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA11相互作用蛋白,为进一步研究HOXA11在个体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室;重庆医科大学发育生物学研究室;
【关键词】： HOXA SMART技术 酵母双杂交
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81300463) 重庆市科委自然科学基金资助项目(编号:cstc2013jcyj A10086) 重庆市杰出青年科学基金资助项目(编号:cstc2012jjjq10001)
【分类号】：R737.11
【正文快照】： HOX基因编码一类进化上高度保守的转录因子,几乎存在于所有的后生动物中,在各个物种中已有300多个HOX基因被鉴定[1]。人类基因组含有39个HOX基因,分别位于HOXA、HOXB、HOXC和HOXD等四个基因丛,每个基因丛含9~12个基因。HOX基因都含有183 bp的homeobox序列,编码61个氨基酸残基

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