稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立

发布时间：2017-07-01 16:07

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【摘要】：目的构建稳定表达miR-449c的人膀胱癌细胞株。方法以HEK293细胞基因组DNA作为模板,采用高保真酶进行扩增得到pre-miR-449c序列,将所得目的片段克隆到Ftet UGW-T载体上;经测序鉴定后,感染5637人膀胱癌细胞;经嘌呤霉素筛选后,利用倒置荧光显微镜观察筛选后的细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达强度,采用荧光实时定量PCR检测miR-449c的表达,Western blot法检测其下游靶基因C-myc蛋白的水平。结果成功构建了Ftet UGW-T/miR-449c慢病毒载体,慢病毒包装后感染5637人膀胱癌细胞成功表达EGFP,感染后的细胞中高表达miR-449c,在稳定表达的膀胱癌细胞中C-myc蛋白表达较对照组显著降低。结论成功构建了稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株。
【作者单位】： 第三军医大学第一附属医院全军泌尿外科研究所;第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室;
【关键词】： microRNA miR-c 膀胱癌 C-myc 稳定细胞株
【基金】：国家自然科学基金(81372726)
【分类号】：R737.14
【正文快照】： 微小RNA(microRNA,miRNA)通过与其靶基因mRNA的3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)完全或不完全配对的方式降解或抑制靶mRNA翻译,从而参与调控细胞生长、增殖、分化以及个体发育等生命活动[1-3]。其中miRNA通过参与肿瘤的生成、增殖、侵袭和向远处转移,发挥抑制或促进

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