血管紧张素Ⅱ1型受体抑制剂缬沙坦对膀胱癌生物学行为的影响及机制的初步探讨

发布时间：2017-07-05 20:08

  本文关键词：血管紧张素Ⅱ1型受体抑制剂缬沙坦对膀胱癌生物学行为的影响及机制的初步探讨

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【摘要】：目的：研究血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株的细胞增殖、迁移及侵袭能力的关系,探讨缬沙坦对不同侵袭能力的膀胱癌细胞株的血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)抗原、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达的影响。为寻找膀胱癌新的治疗方法提供实验数据和靶点。方法：对三株不同侵袭能力的细胞株EJ-M3,EJ,BIU-87进行培养,使用缬沙坦作用于细胞株,采用细胞生长状态测定法(噻唑蓝比色试验法,MTT)检测细胞增殖状况,采用Transwell体外细胞侵袭实验、细胞划痕实验分别检测三种膀胱癌细胞株的侵袭能力和迁移能力的改变。蛋白免疫印迹法(westernb lot)法测定AT1R,MMP2和MMP9蛋白表达水平,实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测AT1R,MMP2和MMP9基因的相对表达。结果：使用10-2mol/L,10-3mol/L、10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L 10-8mol/L,10-9mol/L缬沙坦处理过的细胞,MTT实验测定出的生长曲线选择浓度为10-3mo1/L缬沙坦作为最终浓度药物浓度用于细胞进行下述实验。划痕实验结果显示：划痕处理24h后,EJ-M3对照组和实验组细胞的迁移距离分别为(2.28±0.07)和(1.57±0.12)。EJ对照组和实验组细胞的迁移距离分别为(1.66±0.13)和(1.07±0.04)。BIU-87对照组和实验组细胞的迁移距离分别为(1.24±0.09)和(0.81±0.11)。Transwell细胞小室检测细胞侵袭能力结果显示：光学显微镜下观察计数膜背面实验组较对照组侵入细胞数量明显减少,EJ-M3实验组(154.28±6.24)较对照组(233.39±8.18)相比明显减少,EJ实验组(107.88±6.38)较对照组(150.05±4.73)相比明显减少,BIU-87实验组(50.81±3.41)较对照组(87.19±5.56)相比明显减少,差异具有统计学意义(P0.01)。Western blot电泳结果显示,AT1R、MMP2、MMP9在三个细胞株中均有表达,AT1R电泳条带相对光密度值EJ-M3对照组(3.4871±0.3264)实验组(0.6991±0.1264),EJ对照组(1.5198±0.1123)实验组(0.9198±0.1223),BIU-87对照组(2.2152±0.0112)实验组(0.5288±0.1214)。MMP2电泳条带相对光密度值EJ-M3对照组(3.0571±0.2384)实验组(1.4771±0.1174),EJ对照组(1.4079±0.1028)实验组(0.4579±0.1021),BIU-87对照组(2.9102±0.1302)实验组(0.5429±0.1384)。MMP9电泳条带相对光密度值EJ-M3对照组(0.9885±0.1894)实验组(0.5311±0.1079),EJ对照组(0.7326±0.0121)实验组(0.2178±0.0203),BIU-87对照组(0.5112±0.0172)实验组(0.2078±0.0229)；三组细胞株的实验组较对照组表达均下降,差别有统计学意义(p0.01).AT1RmRNA的相对表达：EJ-M3实验组(3.39±0.14)与对照组(8.32±0.31)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；EJ实验组(3.31±0.19)与对照组(6.28±0.61)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；BIU-87实验组(2.59±0.24)与对照组(5.52±0.22)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；MMP2 mRNA的相对表达：EJ-M3实验组(4.91±0.23)与对照组(8.77±0.58)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；EJ实验组(3.86±0.13)与对照组(6.31±0.43)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；BIU-87实验组(0.85±0.05)与对照组(2.37±0.02)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；MMP9 mRNA的相对表达：EJ-M3实验组(1.18±0.11)与对照组(3.61±0.03)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；EJ实验组(0.944±0.02)与对照组(2.98±0.07)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；BIU-87实验组(0.85±0.02)与对照组(2.59±0.24)比较mRNA表达下降,差别有统计学意义(p0.01)；结论：AngⅡ1型受体抑制剂缬沙坦可有效抑制三株细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。通过进一步实验检测MMP2和MMP9蛋白和基因的表达下降.考虑三株膀胱肿瘤细胞的生物学改变与AT1R、MMP2和MMP9的表达有关,AngⅡ抑制剂有可能成为一种新的抑制膀胱癌转移和延长膀胱癌患者生存期的药物。
【关键词】：膀胱肿瘤 血管紧张素Ⅱ1型受体 基质金属蛋白酶2/9 缬沙坦
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 技术路线图14-15
• 第一部分 缬沙坦对三株膀胱癌细胞的生物学特性的影响15-29
• 1 实验材料15-16
• 2 实验方法16-21
• 3 结果21-26
• 4 讨论26-28
• 5 结论28-29
• 第二部分 缬沙坦对三株膀胱癌细胞AT1R,MMP_2和MMP_9表达的影响29-44
• 1 实验材料29-30
• 2 实验方法30-38
• 3 结果38-42
• 4 讨论42-43
• 5 结论43-44
• 总结44-45
• 参考文献45-49
• 文献综述49-56
• 参考文献53-56
• 攻读学位期间发表文章56
• 攻读学位期间申请课题56-57
• 致谢57

【参考文献】

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本文编号：523410