Cdc42信号蛋白在ACTH保护足细胞机制中的作用探讨

发布时间：2017-07-13 14:03

  本文关键词：Cdc42信号蛋白在ACTH保护足细胞机制中的作用探讨

  更多相关文章： 足细胞 ACTH 阿霉素 cdc42蛋白 actin podocin nephrin

【摘要】：目的:通过观察分析促肾上腺皮质激素(ACTH)作用于阿霉素(ADR)诱导损伤的足细胞后nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表达的变化,来初步探讨cdc42信号蛋白在ACTH保护足细胞的具体地位作用。方法:1.足细胞复苏与培养:将冻存于液氮中的条件永生型小鼠足细胞E11细胞快速融化后于33℃中增殖培养,3~4天传代一次,然后取生长至约90%的足细胞,胰酶消化后传于T75瓶,于37℃无γ-干扰素条件下培养10 d使其分化,此时观察足细胞生长分化形态,若状态良好时可用于试验。2.实验分组:将足细胞分为六组:正常对照组,阿霉素处理组(浓度为1μmol/L的阿霉素处理24小时),ACTH处理组(浓度为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分别处理1h),ZCL278处理组(50u M ZCL278处理1h),阿霉素+ACTH处理组(浓度为1μmol/L的阿霉素处理24小时后再分别加入浓度为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分别处理1h),阿霉素+ACTH+ZCL278处理组(浓度为1μmol/L的阿霉素处理24小时后再分别加入浓度为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml的ACTH分别处理1h,然后再加入50u M ZCL278分别处理1h)。3.检测指标:采用RT-PCR方法检测nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表达;采用Western-blotting技术对nephrin、podocin、actin以及cdc42蛋白表达进行检测。结果:与正常对照组对比,阿霉素处理组nephrin和podocin的m RNA及蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表达未有明显降低。与正常对照组对比,ZCL278处理组cdc42和actin的m RNA及蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05),而nephrin和podocin的m RNA及蛋白表达未有明显降低。与正常对照组对比,中浓度ACTH处理组nephrin和podocin的m RNA及蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表达未有明显升高。与低浓度和高浓度ACTH处理组相比,中浓度ACTH处理组nephrin和podocin的m RNA及蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与阿霉素处理组相比,中浓度阿霉素+ACTH处理组nephrin和podocin的m RNA及蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P0.05),而cdc42和actin的m RNA及蛋白表达未有明显升高。与正常对照组对比,阿霉素+ACTH+ZCL278处理组cdc42和actin的m RNA及蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:足细胞的nephrin和podocin结构蛋白是ACTH保护足细胞的的基础,但这种保护作用并不是通过影响cdc42信号蛋白来表现的,但相信我们的研究能对未来的相关研究提供一些思路及帮助。
【关键词】：足细胞 ACTH 阿霉素 cdc42蛋白 actin podocin nephrin
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 材料与方法11-18
• 实验结果18-20
• 论文图表20-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 参考文献30-33
• 综述33-44
• 参考文献40-44
• 英文缩略词表44-45
• 攻读硕士期间公开发表的论文45-46
• 致谢46-47

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本文编号：537157