乙二胺四乙酸二酐对草酸脱羧酶的修饰改性

发布时间：2017-07-19 02:11

  本文关键词：乙二胺四乙酸二酐对草酸脱羧酶的修饰改性

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【摘要】：为提高草酸脱羧酶(Oxdc)在预防治疗泌尿系结石症方面的稳定性和应用性能,采用乙二胺四乙酸二酐(EDTAD)对Oxdc进行化学修饰,并初步优化了修饰条件:当修饰反应时间为8 h、EDTAD/Oxdc的摩尔比为50:1、反应p H为7.0、反应温度为37℃时,修饰率为71.91%,酶活回收率为75.42%。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)联用分析证明Oxdc和EDTAD共价结合成功。紫外-可见吸收光谱(UV)和圆二色性光谱(CD)分析结果表明,修饰后Oxdc的空间结构发生了一定程度的改变。同时,部分酶学性质研究表明,经EDTAD修饰后的Oxdc较游离的Oxdc,最适p H向碱性方向偏移了约1.5个单位,耐热性和耐胰蛋白酶酶解的能力均显著增强。此外,修饰后的Oxdc在草酸钙上的吸附量明显提高。结果说明修饰后的Oxdc的稳定性显著增强,应用性能有所改善。
【作者单位】： 广西民族大学海洋与生物技术学院广西高校微生物与植物资源利用重点实验室;广西民族大学化学化工学院化学与生物转化过程新技术重点实验室;
【关键词】： 泌尿系结石 酶 草酸脱羧酶 纯化 乙二胺四乙酸二酐 化学修饰 吸附
【基金】：国家教育部留学回国人员科研启动基金项目(教外司留[2012]1707号) 广西自然科学基金项目(2014GXNSFAA118045) 广西民族大学研究生教育创新计划项目(gxun-chxs2015089)~~
【分类号】：R691.4
【正文快照】： 引言泌尿系结石中70%~80%的结石为草酸钙结石[1-2]。目前,虽然可以通过体外冲击波碎石术、经皮肾镜取石术、输尿管镜碎石术、化学药物治疗等物理和化学方法对其进行治疗[3],并取得了一定的疗效;然而,物理、化学方法的治疗费用昂贵、对人体副作用较大,且草酸钙结石具有较高的复，

本文编号：560767