高钙离子诱导人肾小管上皮细胞表达MCP-1和HMGB1的体外研究

发布时间：2017-07-20 10:27

本文关键词：高钙离子诱导人肾小管上皮细胞表达MCP-1和HMGB1的体外研究

【摘要】：目的观察体外培养的人肾小管上皮细胞在高钙离子环境下细胞损伤及炎性因子MCP-1和HMGB1的表达。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2细胞),使用CaCl2配制成不同钙离子浓度的溶液作为刺激剂,实验分为①正常对照组(+正常培养液)、②Ca Ⅰ组(5mmol/L Ca2+液)、③Ca Ⅱ组(10mmol/LCa2+液)、④Ca Ⅲ组(15 mmol/L Ca2+液)。各组细胞分别培养至3 h、6 h、9 h时,采用MTT法检测细胞活力。培养6 h时,采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞凋亡染色,观察各组细胞凋亡情况；同时收集细胞培养上清液,采用ELISA法分别检测各组细胞上清液过氧化氢(H2O2)和8-IP浓度,微量酶标仪法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性。此外,培养6 h时收集各组细胞,采用RT-qPCR法检测细胞MCP-1和HMGB1的mRNA表达情况；并收集各组细胞上清液,采用ELISA法检测其MCP-1、HMGB1的含量。结果随着细胞培养液中钙离子浓度的增加,细胞活力抑制率和细胞凋亡明显增加。LDH活性在正常对照组、Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组、Ca Ⅲ组分别为16.67±4.43U/L、51.42±7.70 U/L、69.15±8.54 U/L、85.46±8.60 U/L,各组间差异有统计学显著性(P0.05)。细胞上清液H2O2的浓度在正常对照组、Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组、Ca Ⅲ组分别为17.30±0.28 mmol/L.19.10±0.33 mmol/L.21.56±0.28 mmol/L.24.30±0.16 mmol/L,各组间差异有统计学显著性(P0.05)。细胞上清液8-IP的含量在正常对照组、Ca Ⅰ组、Ca Ⅱ组、Ca Ⅲ组分别为21.55±4.31 ng/ml,61.12±4.55 ng/ml, 78.48±2.57 ng/ml,94.74±3.34 ng/ml,各组间差异有统计学显著性(P0.05).RT-qPCR的结果显示,与对照组比较,3个钙离子诱导组细胞MCP-1和HMGBl的mRNA表达水平升高,差异有统计学显著性(P0.05)。此外,各组细胞上清液MCP-1含量测定值分别为13.48±1.60 pg/mL、22.93±2.86 pg/mL、40.57±1.63 pg/mL、 30.39±1.61 pg/mL,各组间差异有统计学显著性(P0.05)；细胞上清液HMGB1含量分别为138.17±5.99 pg/mL、181.82±4.54 pg/mL、346.81±20.26 pg/mL、223.15±16.0 pg/mL,各组间差异有统计学显著性(P0.05)。结论本研究结果提示,高钙离子可诱导人肾小管上皮细胞出现氧化应激损伤,同时细胞高表达MCP-1和HMGB1。由MCP-1和HMGB1引发的炎症反应可能是高钙尿参与结石形成的重要机制。
【关键词】：高钙尿 人肾小管上皮细胞 炎症 MCP-1 HMGB1
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R691.4
【目录】：

个人简历3-5
中文摘要5-7
英文摘要7-10
前言10-13
实验材料13-16
实验方法16-30
结果30-46
讨论46-51
结论51-52
参考文献52-57
附录57-58
综述58-73
参考文献66-73
致谢73-74
攻读硕士期间发表的学术论文74

【相似文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 丁宁;肖慧;高巨;许立新;佘守章;;HMGB1启动子红色荧光蛋白报告基因载体的构建及在机械牵张诱导下的活性检测[J];第三军医大学学报;2009年22期

2 Baoping Chang;Xiao Wang;Songsou Gao;Bianfeng Zhao;Wanli Wang;Shaohua Yang;Qian Chu;Shiying Yu;;乳腺浸润性导管癌组织中HMGB1表达的临床意义(英文)[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2014年05期

3 唐小兰;郗爱旗;;HMGB1与动脉粥样硬化炎症机制的研究进展[J];西南军医;2013年05期

4 丁宁;肖慧;高巨;许立新;佘守章;;HMGB1启动子荧光素酶报告基因的构建及鉴定[J];第四军医大学学报;2009年22期

5 贺小燕;王海琳;陈晓红;陈丑彦;;HMGB1在卵巢癌中的表达及临床意义[J];现代生物医学进展;2011年04期

6 易世红;孙陆果;魏成国;黄红兰;;脂多糖刺激对小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1表达的影响[J];中国生物制品学杂志;2009年08期

7 欧阳华伟;谭军;李高峰;罗成群;;小鼠HMGB1突变型启动子荧光素酶报告基因的构建[J];实用预防医学;2012年08期

8 栾正刚;郭仁宣;;HMGB1对急性坏死性胰腺炎大鼠肠上皮细胞紧密连接相关蛋白表达的影响[J];中国现代普通外科进展;2013年01期

9 张巧玲;任少敏;;HMGB1细胞因子作用研究进展[J];疾病监测与控制;2013年05期

10 肖建彪;陈龙华;陈斌;;HMGB1在多种人体恶性肿瘤组织、癌旁组织中的表达及意义[J];山东医药;2013年12期

中国重要会议论文全文数据库前9条

1 叶惠惠;张咏梅;刘河霞;张娇丽;吴克俭;;HMGB1协同Toll样受体4/MyD88/NF-κB参与小鼠酒精性胃黏膜损伤过程[A];中国生理学会消化内分泌生殖代谢生理专业委员会2011年消化内分泌生殖学术会议论文摘要汇编[C];2011年

2 张晓娟;栾正刚;马晓春;;构建HMGB1基因真核细胞表达载体[A];中华医学会第五次全国重症医学大会论文汇编[C];2011年

3 孟二红;郭子宽;吴祖泽;王立生;;HMGB1对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响[A];第11次中国实验血液学会议论文汇编[C];2007年