膀胱癌血清microRNA诊断模型的建立及其对膀胱癌复发监测的临床意义

发布时间：2017-07-30 21:17

  本文关键词：膀胱癌血清microRNA诊断模型的建立及其对膀胱癌复发监测的临床意义

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【摘要】：目的：通过对侵袭性膀胱癌膀胱癌、非侵袭性膀胱癌和对照血清中microRNA(miRNA)进行高通量检测,确定膀胱癌血清miRN A特异表达谱,建立膀胱癌血清-miRNA诊断模型,并评价该miRNA模型对膀胱癌的诊断价值,同时探讨血清miRNA与膀胱癌复发的关系。方法：1.在测序阶段,利用Miseq测序的方法,选取10名侵袭性膀胱癌、10名非侵袭性膀胱癌和10名对照者血清分别混合后进行高通量的miRNA序列测定,对测序结果进行对比分析,获取膀胱癌血清miRNA特异表达谱,筛选出膀胱癌组与对照组间差异表达的miRNA.2.在确证阶段,采用qRT-PCR技术,首先在120名膀胱癌患者和120名对照者血清中对初步筛选出的差异表达miR NA进行验证,进一步确定差异表达有统计学意义的miRNA。将确定的差异表达miRNA带入多元Iogisitic回归分析,建立膀胱癌血清miRNA诊断模型,采用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve, ROC)分析膀胱癌血清1miRNA诊断模型的诊断效能。3.在验证阶段,另选取110位膀胱癌患者和110名对照者血清,采用qRT-PCR方法再次验证差异表达有统计学意义的miRNA,并评价血清miRNA诊断模型对膀胱癌的诊断价值。同时获取110位膀胱癌患者和110名对照者的尿液标本进行传统的尿液脱落细胞学检查,对比分析膀胱癌血清miRNA诊断模型与尿液脱落细胞学对膀胱癌的诊断价值。4.分别跟踪分析验证阶段110名侵袭性膀胱癌和110名非侵袭性膀胱癌患者的复发信息。采用Kaplan-Meier方法进行膀胱癌患者无复发生存曲线分析,通过Cox比例风险模型分别分析可用于侵袭性膀胱癌和非侵袭性膀胱癌复发监测的独立预后因素。结果：1.测序阶段候选miRNA的筛选：经血清Miseq测序,共检测了529个miRNA (≥1个拷贝),其中在侵袭性膀胱癌组、非侵袭性膀胱癌组和对照组中分别确定了259、180和206个miRNA (≥10个拷贝)。经初步筛选,共选取了26个在膀胱癌和对照者血清中差异表达的miRNA,其中18个]miRNA在膀胱癌组血清中表达下调(miR-484, let-7b-5p, let-7a-5p, miR-30a-5p, miR-181b-5p, miR-1228-5p, miR-181a-5p, miR-27a-3p, miR-3135b, miR-3187-3p, miR-185-5p, miR-15a-5p, miR-15b-5p, miR-92b-5p, miR-342-3p, miR-501-3p, miR-148a-3p, 和 let-7i-5p),8 个 miRNA在膀胱癌组血清中表达上调(miR-24-3p, let-7c, miR-128, miR-98, miR-148b-3p, miR-30d-5p, miR-1294,和miR-152)。2.在确证阶段,经qRT-PCR初次验证,膀胱癌血清中miR-152, miR-148b-3p表达升高,miR-3187-3p, miR-15b-5p, miR-27a-3p, miR-30a-5p表达降低(均p0.001)。ROC评估miR-152, miR-148b-3p, miR-3187-3p, miR-15b-5p, miR-27a-3p 和 miR-30a-5p诊断膀胱癌的受试者工作曲线下面积(area underthe ROC,AUC)分别为0.738,0.729,0.814,0.715,0.703和0.654。通过Logistic多元回归分析建立了基于六个1niRNA分子的膀胱癌血清miRNA诊断模型,此诊断模型AUC为0.956(95%CI为0.922-0.978,灵敏度为90.00%,特异度为90.00%)。3.在验证阶段,经qRT-PCR再次验证后表明,膀胱癌血清miRNA诊断模型AUC为0.899(95%CI为0.851-0.936,灵敏度为80.00%,特异度为89.09%)。其对Ta,T1和T2-T4期膀胱癌的灵敏度分别为90.00%,84.85%,89.36%,明显高于尿液脱落细胞学相应的13.33%,30.30%,44.68%,(均p0.001)。4.在非侵袭性膀胱癌患者组,Kaplan-Meier分析显示,高表达miR-152膀胱癌患者较低表达miR-152膀胱癌患者的无复发生存率低(p=0.023),低表达miR-3187-3p膀胱癌患者较高表达miR-3187-3p膀胱癌患者的无复发生存率低(p=0.043)。多变量Cox回归分析显示,miR-152和临床病理分期可以作为非侵袭性膀胱癌复发的独立预后指标(p分别为0.028和0.026)。在侵袭性膀胱癌患者组,未发现与膀胱癌复发相关的独立预后因素。结论：1.膀胱癌血清miRNA诊断模型(miR-152, miR-148b-3p, miR-3187-3p, miR-15b-5p, miR-27a-3p 和 miR-30a-5p)对膀胱癌早期诊断具有一定的临床意义。2.血清miR-152可作为非侵袭性膀胱癌复发监测的独立预后指标。
【关键词】：膀胱癌 血清microRNA 诊断 复发
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符号说明12-13
• 前言13-18
• 实验材料18-23
• 实验方法23-29
• 结果29-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 附图表39-51
• 参考文献51-58
• 致谢58-59
• 攻读学位期间发表的论文59-60
• 附件60

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本文编号：596113