IGF-1对肾小管上皮细胞转分化作用机制的影响

发布时间：2017-07-31 13:33

  本文关键词：IGF-1对肾小管上皮细胞转分化作用机制的影响

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【摘要】：目的:探讨PI3K/Akt通路在IGF-1诱导的人肾小管上皮细胞(human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKCs)间质转分化过程中的作用和意义。方法:用含10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12(1:1)培养液将HKCs细胞培养于6孔板或培养瓶中,待细胞生长至亚融合状态,吸弃培养基,换成无血清(free serum medium,FSM)的培养基继续培养24h,然后分成:①正常对照组:用10%FBS的DMEM/F12培养液培养细胞;②IGF-1(50ug/L)组:用50ug/L IGF-1培养细胞;③IGF-1+PI3K/Akt抑制剂LY294002组:用50ug/L IGF-1+15umol/L LY294002培养细胞;按以上分组分别培养24h、48h和72h。免疫印迹法(western blotting)方法检测a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)、总Akt(t-Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。再按上述方法将细胞分为:①正常对照组;②IGF-1(50ug/L)组;③IGF-1+不同浓度的LY294002(5、15、20umol/L)组,共同培养48h。倒置相差显微镜观察细胞形态变化;聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测a-SMA和p-Akt m RNA表达水平。DAPI染色法检测HKCs细胞凋亡的情况。结果:(1)WB结果显示:随着IGF-1(50ug/L)作用时间的延长,a-SMA蛋白表达上调(p0.05),Akt蛋白表达上调(p0.05),p-Akt蛋白表达上调(p0.05),且作用呈时间依赖性。(2)与IGF-1(50ug/L)单独作用于HKCs细胞相比,IGF-1(50ug/L)和LY294002(15umol/L)共同作用后,a-SMA蛋白表达下调(p0.05),Akt蛋白表达下调(p0.05),p-Akt蛋白表达下调(p0.05),且作用呈时间依赖性。(3)IGF-1(50ug/L)作用48h后,RT-PCR结果显示:a-SMA m RNA表达明显增加(p0.05),p-Akt m RNA表达明显增加(p0.05)。(4)不同浓度的LY294002均能使p-Akt m RNA表达减少(p0.05),a-SMA m RNA表达减少(p0.05),且作用呈浓度依赖性。(5)相差显微镜结果显示:正常对照组细胞呈卵石样紧密排列生长;IGF-1刺激使HKCs细胞形态显著变化,由椭圆形变为梭形,同时促进HKCs细胞增殖;LY294002可阻碍这种变化。(6)DAPI结果显示:IGF-1能够抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,而加入不同的LY294002后却表现出典型的凋亡形态特征,且呈浓度和时间依赖性。结论:(1)IGF-1能诱导HKCs细胞中PI3K/Akt激活,从而促进肾小管上皮细胞转分化,参与糖尿病肾病的发生发展;(2)PI3K/Akt通路参与IGF-1诱导的转分化过程,PI3K/Akt是IGF-1诱导EMT信号转导通路中的下游因子之一;(3)PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002可抑制IGF-1诱导的转分化作用,提示LY294002可能通过抗纤维化作用保护肾脏。
【关键词】：胰岛素样生长因子 肾小管上皮细胞 转分化 PI3K/Akt
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 常用英文缩略词表9-10
• 前言10-15
• 材料与方法15-24
• 结果24-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述43-52
• 参考文献49-52
• 致谢52

【参考文献】

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本文编号：599419