肥大细胞及蛋白激酶受体-2与大鼠间质性膀胱炎的相关性研究

发布时间：2017-07-31 23:13

  本文关键词：肥大细胞及蛋白激酶受体-2与大鼠间质性膀胱炎的相关性研究

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【摘要】：[目的]建立大鼠间质性膀胱炎(IC)模型；通过检测肥大细胞(MC)及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)的表达,研究PAR-2及肥大细胞与IC的关系,进而为IC的治疗寻求新靶点。[方法]SD雌性大鼠30只,随机分为3组：实验组1(IC组)10只,实验组2 (IC+PAR-2抑制剂处理)10只,对照组(磷酸缓冲液膀胱组)10只。(1)实验组1经尿道膀胱灌注10 mg/ml的硫酸鱼精蛋白1 ml,保留45 min,排尽药物后用磷酸缓冲液(PBS)冲洗3次：灌注750ug/ml的脂多糖1 ml,保留30 min,排尽药物后用PBS冲洗3次,拔出导管。间隔2天注射1次,注射4周。(2)实验组2在实验组1基础上加入200mmol/l亮抑酶肽素1m1,保留15-30min。间隔2天注射1次,注射4周。(3)对照组磷酸缓冲液膀胱灌注。1.通过HE染色观察研究对象IC动物模型病理学特征2.甲苯胺蓝染色检测大鼠膀胱MC的数量3.免疫组化双染色计算PAR-2阳性细胞及MC总阳性细胞数量4. PT-PCR计算实验对象PAR-2表达情况5. Masson染色观察IC动物模型胶原纤维和肌纤维的改变。[结果]1.实验组中膀胱黏膜变薄,固有层中毛细血管扩张充血,肌层中纤维组织增生明显,有淋巴细胞和肥大细胞的浸润：对照组膀胱黏膜无变薄,固有层毛细血管无扩张,炎症细胞较少见,肌层纤维组织增生不明显。2.肥大细胞经甲苯胺蓝染色呈紫红色,实验组1中的肥大细胞数量明显增多,尤其是脱颗粒的肥大细胞；实验组2中极少见脱颗粒细胞；对照组中只见到轻度增加的肥大细胞。3.PAR-2在膀胱组织中表达的阳性反应产物呈棕黄色,实验组1中可见到棕黄色的阳性反应细胞；而实验组2、对照组几乎找不到类似阳性反应细胞。4.实验组1Masson染色可见明显增生的胶原纤维和肌纤维；实验组2、对照组仅见少量增生的胶原纤维。[结论]1.本实验通过经尿道膀胱灌注硫酸鱼精蛋白和脂多糖可以成功构建大鼠间质性膀胱炎(IC)动物模型。2.实验组膀胱组织的肥大细胞增加明显,且脱颗粒细胞明显增加,膀胱肌层纤维化明显,由此推测肥大细胞与间质性膀胱炎密切相关。3.实验组中PAR-2的表达增多,其表达与间质性膀胱炎的膀胱纤维化呈正相关。4.MC及PAR-2在IC的膀胱组织纤维化中扮演重要角色；抑制PAR-2的表达可减轻IC的膀胱组织纤维化。
【关键词】：间质性膀胱炎 肥大细胞 PAR-2 纤维化
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R694.3
【目录】：

• 缩略词表8-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-14
• 1. 材料14-16
• 1.1 试剂14
• 1.2 仪器14-15
• 1.3 动物15-16
• 2. 方法16-24
• 2.1 配制溶液16
• 2.2 动物实验16-17
• 2.3 HE染色17-18
• 2.4 甲苯胺蓝染色18-19
• 2.5 免疫组化染色19
• 2.6 Masson染色19-20
• 2.7 RT-PCR20-23
• 2.8 统计学处理23-24
• 3. 结果24-33
• 3.1 HE染色24-25
• 3.2 甲苯胺蓝染色25-26
• 3.3 免疫组化染色26-28
• 3.4 Masson染色28-29
• 3.5 RT-PCR29-32
• 3.6 比较32-33
• 4. 讨论33-39
• 5. 结论39-40
• 参考文献40-43
• 附录43-44
• 综述44-50
• 参考文献47-50
• 发表论文50-51
• 致谢51

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本文编号：601529