DPP-Ⅳ抑制剂西格列汀对高糖状态下肾小管上皮细胞p38MAPK通路的影响

发布时间：2017-08-03 03:04

  本文关键词：DPP-Ⅳ抑制剂西格列汀对高糖状态下肾小管上皮细胞p38MAPK通路的影响

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【摘要】：目的:1.观察所培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)的形态,掌握培养细胞的基本过程。2.研究西格列汀对高糖诱导下肾小管上皮细胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响,进一步探讨DPP-IV抑制剂西格列汀对糖尿病肾病可能的作用机制。方法:将NRK-52E复苏在含10%FCS的DMEM低糖培养基中,放入条件为37℃、5%CO2的培养箱中传代培养,待NRK-52E生长绝大部分融合时,换用不含FCS的DMEM低糖培养基培养24h后分组。将同步后的NRK-52E分为:正常糖组、高渗组、高糖组、p38MAPK通路抑制剂(SB202190)+高糖组、西格列汀干预+高糖组,采用Western blot印迹检测p38MAPK信号通路的活化情况;PCR检测促凋亡因子bax mRNA与抗凋亡因子bcl-2 mRNA相对量比值;流式细胞法检测同一时刻NRK-52E凋亡率、凋亡蛋白caspase3、凋亡相关因子bax与bcl-2的比值。结果:1.Western blot检测到正常糖组以及高渗组磷酸化p38表达很少;而高糖可引起NRK-52E细胞p38MAPK信号通路的活化,磷酸化p38蛋白表达明显增多;在应用p38MAPK特异性抑制剂SB202190后,25mmol/L高糖环境NRK-52E细胞p38MAPK通路的活化明显减少;西格列汀亦有同样的作用,可减少25mmol/L高糖刺激所引起的p38MAPK通路的活化,减少其下游p38磷酸化蛋白的表达。2.PCR检测可见高糖组细胞bax mRNA/bcl-2 mRNA较正常组和高渗透压组明显增加;SB202190组细胞bax mRNA/bcl-2 mRNA较高糖组明显下降,差异有统计学意义(P0.05);西格列汀组细胞bax mRNA/bcl-2 mRNA较高糖组也下降,差异有统计学意义(P0.05)。3.流式细胞法检测到25mmol/L高糖刺激12h、24h、48h均可见NRK-52E细胞凋亡,24h出现凋亡明显增加,以48h最为明显。48h高糖组细胞凋亡率为(17.5±0.35)%,显著高于正常组(4.8±0.24)%和高渗组(5.2±0.32)%;SB202190组细胞凋亡率为(11.3±0.19)%,较高糖组明显下降35%,差异有统计学意义(P0.05);西格列汀组NRK-52E凋亡率为(14.2±0.31)%,较高糖组下降19%,差异有统计学意义(P0.05)。高糖组凋亡蛋白caspase3的表达率为(28.1±0.53)%,显著高于正常组(2.7±0.13)%和高渗组(3.2±0.20)%;SB202190组caspase3的表达率为(14.6±1.25)%,较高糖组下降40%,差异有统计学意义(P0.05);西格列汀组NRK-52E caspase3的表达率为(20.9±0.87)%,较高糖组下降25%,差异有统计学意义(P0.05)。高糖(浓度25mmol/L)刺激48h后NRK-52E细胞bax/bcl-2为(2.87±0.25),显著高于正常组(0.41±0.17)和高渗组(0.42±0.13);SB202190组bax/bcl-2为(0.70±0.16),较高糖组明显下降,差异有统计学意义(P0.05);西格列汀组NRK-52E细胞bax/bcl-2为(0.78±0.21),较高糖组下降明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.高糖状态下肾小管上皮细胞p38MAPK通路活化,磷酸化p38蛋白及凋亡相关蛋白bax、caspase3表达增加;2.西格列汀能够减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与部分抑制p38MAPK信号通路相关。
【关键词】：西格列汀 肾小管上皮细胞 凋亡 p38MAPK 高糖
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-12
• 1 材料与方法12-20
• 1.1 实验材料12-14
• 1.2 实验方法14-19
• 1.3 统计学处理19-20
• 2 结果20-26
• 2.1 细胞毒性实验20-21
• 2.2 Western blot检测各组细胞p38MAPK途径的活化及表达21
• 2.3 PCR检测各组肾小管上皮细胞bax mRNA/bcl-2 mRNA21-22
• 2.4 流式细胞法检测细胞凋亡率、caspase3表达以及bax/bcl-222-24
• 2.5 附图24-26
• 3 讨论26-29
• 4 结论29-30
• 参考文献30-33
• 综述33-40
• 参考文献37-40
• 致谢40-41
• 在学期间研究成果41-42
• 个人简历42

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