Cullin1在肾癌发生发展中的作用及其分子机制研究

发布时间：2017-08-08 15:06

  本文关键词：Cullin1在肾癌发生发展中的作用及其分子机制研究

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【摘要】：目的:研究Cullin1基因在肾癌中的表达情况及其在肾癌细胞增殖、迁移与侵袭中的作用,并深入研究Cullin1基因在肾癌发生发展过程中发挥上述作用的分子机制。方法:体外实验:首先利用组织微列阵技术及免疫组织化学法(IHC)检测Cullin1在307例肾癌组织与34正常肾组织中的表达情况,分析Cullin1(Cul1)表达与临床病理因素及肾癌患者生存预后的关系;然后用在体外化学合成的Cullin1 si RNA和Control si RNA转染人肾癌786-O及ACHN细胞,用Western Blot技术检测Cullin1si RNA干涉Cullin1蛋白表达的效果,用CCK-8及细胞周期流式分析检测Cullin1si RNA转染后肾癌细胞增殖情况的变化,用迁移及侵袭实验检测转染Cullin1 si RNA后肾癌细胞迁移与侵袭能力的变化,用Western Blot实验研究Cullin1 si RNA干涉肾癌786-O及ACHN细胞后,肾癌细胞中Cyclins、p21、p27、MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2蛋白表达的变化情况。体内实验:通过慢病毒重组技术将Cullin1 si RNA和Control si RNA序列整入慢病毒中,再用整合好的慢病毒转染786-O-Luc细胞,用嘌呤霉素筛选转染后的细胞一个月,之后选择BALB/c裸鼠,用PBS重悬786-O-Luc-Cullin1-sh RNA及786-O-Luc-Control-sh RNA细胞,细胞密度约为1×107个/200μL,每只老鼠皮下注射Control sh RNA及Cullin1 sh RNA细胞200μL,一月后用小动物活体成像系统检测皮下成瘤生物发光信号,观察其成瘤情况。结果:体外实验:1、免疫组织化学法(IHC)显示:Cullin1在肾癌组织的表达高于正常肾组织,差异有统计学意义(P0.05),Cullin1的表达在T4期肾癌患者中明显高于T1-T3期患者,差异有统计学意义(P0.05),Cullin1的表达情况与患者的疾病相关存活率及总生存率无关(P0.05)。2、Western Blot实验显示:与Control si RNA组相比,转染Cullin1 si RNA后肾癌786-O和ACHN细胞中的Cullin1蛋白表达量下降;3、细胞增殖实验显示:转染Cullin1 si RNA的肾癌786-O和ACHN细胞增殖能力与Control si RNA组相比明显下降,差异有统计学意义(786-O组P0.05,ACHN组P0.05),流式分析显示在干涉Cullin1的表达后两种细胞G1期细胞数增多,S期减少;4、细胞迁移实验显示:Cullin1 si RNA转染肾癌786-O和ACHN细胞后,其穿过Transwell小室的细胞的数目与Control si RNA组相比分别下降了53%和79%,差异有统计学意义(786-O组P0.05,ACHN组P0.05);5、细胞侵袭实验显示:Cullin1si RNA转染肾癌786-O和ACHN细胞后,其穿过Transwell小室的细胞数目与Control si RNA组相比分别下降了95%和74%,差异有统计学意义(786-O组P0.05,ACHN组P0.05);6、Western Blot实验显示:肾癌786-O和ACHN细胞转染Cullin1 si RNA后,与对照组相比其p21、p27、TIMP-1蛋白表达量增多,Cyclin D1、Cyclin E2、MMP-9蛋白表达量下降,MMP-2及TIMP-2蛋白表达量无变化。体内实验:与Control sh RNA组相比,Cullin1 sh RNA组裸鼠皮下生物发光信号明显减弱,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:Cullin1在肾癌组织中呈高表达,表明其可能是一个促癌基因,干涉Cullin1基因可以通过增加周期蛋白抑制p21及p27蛋白的表达来抑制周期蛋白Cyclin D1及Cyclin E2的表达从而抑制细胞增殖,此外干涉肾癌Cullin1基因可以通过增强基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-1蛋白的表达来抑制MMP-9信号通路,从而降低肾癌细胞的迁移、侵袭能力。由实验结果推断,Cullin1可以作为肾癌患者预后监测指标,是一个潜在治疗靶点。
【关键词】：Cullin1 肾癌 细胞增殖 迁移 侵袭
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 序言9-11
• 材料和方法11-27
• 1 材料11-17
• 2 方法17-26
• 3 数据分析26-27
• 结果27-37
• 1.CULLIN1蛋白在肾癌组织中的表达情况27-28
• 2.CULLIN1的表达情况与肾癌患者临床资料间的关系28-29
• 3.CULLIN1的表达与患者的生存及预后无关29
• 4.干涉CULLIN1的表达抑制肾癌细胞的增殖能力29-32
• 5.干涉CULLIN1的表达抑制肾癌细胞的迁移与侵袭能力32-35
• 6.干涉肾癌 786-O细胞CULLIN1的表达可以抑制其在动物模型中的生长35-37
• 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-45
• 综述45-52
• 参考文献49-52
• 缩略词表52-54
• 攻读学位期间公开发表的论文54-55
• 致谢55-56

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本文编号：640580