白介素35在肾透明细胞癌及前列腺癌患者中的表达分析及机制研究

发布时间：2017-08-09 06:25

  本文关键词：白介素35在肾透明细胞癌及前列腺癌患者中的表达分析及机制研究

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【摘要】：第一部分:IL-35在肾透明细胞癌及前列腺癌患者中高表达目的:检测并分析肾透明细胞癌患者及前列腺癌患者血及组织中白介素35(IL-35)表达水平及其与肿瘤临床病理特征之间的关系。方法:2015年1月至2015年12月期间于苏州大学附属第一医院首次诊断为肾透明细胞癌的64例患者及前列腺癌的20例患者作为病人组,53例健康志愿者作为对照组被纳入研究。收集两组患者的血清及外周血单个核细胞,利用酶联免疫吸附测定、实时定量PCR方法及免疫荧光技术,检测血清中IL-35的表达水平、外周血单个核细胞中IL-35m RNA的表达水平,以及肾癌组织和正常肾组织中IL-35的表达水平,并分析其与肿瘤临床病理之间的关系。结果:(1)肾透明细胞癌患者血清中IL-35水平为106.39±57.53 pg/m L,而健康志愿者血清中IL-35水平为65.18±18.23 pg/m L,肾透明细胞癌患者血清中IL-35水平明显高于健康志愿者,两者差异有统计学意义(p0.05)。(2)实时定量PCR结果与血清中IL-35表达量的结果相符,肾透明细胞癌患者及前列腺癌患者外周血单个核细胞(PBMCs)中p35及EBI3(IL-35的两个亚基)的m RNA的表达量也有明显差异。肾透明细胞癌患者及前列腺癌患者PBMCs中p35及EBI3的m RNA表达量明显高于健康志愿者(p35,p0.0001;EBI3,p0.0001)。(3)对比癌组织及非癌组织中IL-35的表达量,我们发现IL-35在癌组织中的表达量明显高于癌旁组织及非癌组织(p0.0001)。(4)肾透明细胞癌患者血清中IL-35水平与淋巴结转移(P0.0001)及肿瘤分期(p0.0001)正相关(5)IL-35在肾透明细胞癌中诊断敏感性和特异性在最佳截点80.13pg/ml时分别为60.9%和90.6%,曲线下面积为0.784,诊断正确率为72.6%。结论:肾透明细胞癌及前列腺癌患者中IL-35表达量明显升高,提示IL-35有望作为肾透明细胞癌及前列腺癌患者诊断和预后判断的一个指标。第二部分:IL-35在小鼠肾癌及前列腺癌模型发生发展中的作用及机制研究目的:目前IL-35已在多种模型中被证实有免疫抑制功能,能抑制多种自身免疫性疾病。而IL-35在肿瘤微环境中的作用尚未完全明了,结合第一部分研究结果,我们探究了IL-35在小鼠泌尿系肿瘤发生发展中的作用及其作用机制。方法:(1)构建表达小鼠IL-35的微环质粒。(2)构建稳定表达IL-35的RENCA肾癌细胞系及RM-1前列腺癌细胞系。(3)建立肾癌、前列腺癌小鼠皮下荷瘤模型。(a)14只小鼠随机分为2组,分别做以下处理:通过高压水流动力学注射方法将表达IL-35的微环质粒和对照的微环质粒注射到小鼠体内;各组小鼠于注射质粒24h后皮下注射肾癌细胞系RENCA(106/100μL)/前列腺癌细胞系RM-1(106/100μL),观察肿瘤生长情况。(b)14只小鼠随机分为2组,实验组皮下注射稳定表达IL-35的肾癌细胞系RENCA(106/100μL)/前列腺癌细胞系RM-1(106/100μL),对照组皮下注射对照细胞,观察肿瘤生长情况。(5)流式细胞术检测荷瘤小鼠体内免疫细胞亚型的比例。结果:(1)成功构建IL-35微环质粒真核表达载体。(2)成功构建稳定表达IL-35的肾癌、前列腺癌细胞系。(3)在两种小鼠皮下肿瘤模型中,IL-35均能促进肿瘤的发生发展。(4)IL-35增加了肿瘤微环境中调节性T细胞(Treg)和髓系来源抑制性细胞(MDSCs)的比例,减少了CD4+、CD8+T细胞的比率。结论:我们研究发现IL-35可能通过增加肿瘤微环境中Treg以及MDSCs的表达量,抑制抗肿瘤免疫反应,从而促进肿瘤生长。
【关键词】：白介素35 肾透明细胞癌 前列腺癌 肿瘤标记物 诊断 预后 IL-35 真核表达载体 稳定表达细胞系 肿瘤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11;R737.25
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分：IL-35 在肾透明细胞癌及前列腺癌患者中的表达情况10-25
• 一、引言10-11
• 二、材料和方法11-16
• 三、结果16-20
• 四、讨论20-22
• 参考文献22-25
• 第二部分：IL-35 在小鼠肾癌及前列腺癌发生发展中的作用及机制研究25-46
• 一、引言25
• 二、材料和方法25-34
• 三、结果34-40
• 四、讨论40-44
• 参考文献44-46
• 综述46-52
• 参考文献49-52
• 攻读学位期间公开发表的论文52-53
• 主要试剂配制53-54
• 附录54-55
• 致谢55-57

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本文编号：643892