血管紧张素Ⅱ诱导HMC细胞中SOCS-1和相关炎症因子的表达及荔枝核皂苷的干预作用研究

发布时间：2017-08-13 08:28

  本文关键词：血管紧张素Ⅱ诱导HMC细胞中SOCS-1和相关炎症因子的表达及荔枝核皂苷的干预作用研究

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【摘要】：目的:(1)通过体外细胞实验,探讨血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)在糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)中的作用机制,明确Ang Ⅱ对肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HMC)的增殖及荔枝核皂苷(Saponin of Litchi Seed,SLD)的干预作用和机制。(2)明确炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)在DN发生发展中的重要作用。(3)研究细胞因子信号抑制因子-1(Suppressor of cytokine signaling-1,SOCS-1)在DN中的地位和作用,明确SOCS-1的表达可以减轻DN的炎症反应。方法:(1)将HMC细胞分为5组:(1)正常组:正常培养细胞(2)Ang Ⅱ 10-6mol/ml组(3)Ang Ⅱ 10-7mol/ml组(4)Ang Ⅱ 10-8 mol/ml组(5)空白调零组:无细胞。(2)首先以MTT比色法进行Ang Ⅱ有效作用浓度的筛选,随后采用不同浓度SLD(5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml)干预,作用时间为48h后收集各组细胞上清液和细胞。(3)应用MTT比色法检测HMC细胞增殖;酶联免疫实验(Elisa法)检测细胞上清液中IL-1β、IL-6的含量;运用蛋白免疫试验(western blot法)检测SOCS-1信号蛋白的表达。结果:(1)MTT法检测结果显示,Ang Ⅱ作用于HMC细胞后,吸光度值(OD值)明显增加(P0.05),10-6 mol/ml Ang Ⅱ在48h作用最明显(P0.01)。(2)MTT法检测结果显示,与Ang Ⅱ组相比,SLD高、中、低剂量组均显著抑制HMC细胞的增殖(P0.01),其中以SLD高剂量组48h抑制率最高(55.43%);(3)ELISA法检测结果显示,与Ang Ⅱ组比较,SLD各剂量组能够抑制HMC细胞的IL-1β、IL-6水平(P0.01或P0.05)(4)Western Blot结果显示,Ang Ⅱ组示SOCS-1的蛋白表达量升高,明显高于正常组,差异显著(P*0.01)。Ang Ⅱ+SLD组与Ang Ⅱ组比较,蛋白表达量显著下降(P*0.01),但与正常组比较仍然较高。结论:(1)Ang Ⅱ诱导HMC细胞增殖的最佳作用浓度为10-6 mol/ml,吸光度值在48小时作用最明显。(2)随着SLD浓度、时间的增长,抑制率也逐渐增加。说明SLD对HMC细胞增殖的抑制率与浓度、时间密切相关。(3)SLD可使HMC细胞分泌的细胞因子IL-6、IL-1β的含量显著下降,且能抑制HMC细胞的增殖,可减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌,从而延缓肾小球硬化的进程。(4)Ang Ⅱ可以通过SOCS-1信号通路刺激HMC细胞炎症因子的表达,SLD可以抑制HMC细胞蛋白的表达,为研究糖尿病肾病提供新的思路。
【关键词】：糖尿病肾病 血管紧张素Ⅱ 荔枝核皂苷
【学位授予单位】：长春中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文缩略语10-11
• 前言11-12
• 文献综述12-18
• 1 病名的探讨12-13
• 1.1 古代医家的认识12
• 1.2 现代医家的认识12-13
• 2 病因病机13-14
• 2.1 气阴两虚型13
• 2.2 脾肾亏虚型13
• 2.3 瘀血阻络型13-14
• 2.4 毒损肾络型14
• 2.5 肝肾两虚型14
• 3 辨证论治14-16
• 3.1 分型辨证14-15
• 3.2 分期辨证15-16
• 4 专方验方16-17
• 5 总结与展望17-18
• 实验研究18-33
• 1 材料与仪器18-20
• 1.1 材料18-19
• 1.2 仪器19-20
• 2 方法20-29
• 2.1 溶液的配置20-22
• 2.2 HMC细胞培养22-23
• 2.3 实验分组23
• 2.4 MTT法筛选AngⅡ有效作用浓度23-24
• 2.5 MTT法检测荔枝核皂苷对HMC细胞增殖的影响：24-25
• 2.6 ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、IL-6 的含量25-26
• 2.7 运用Western blot方法检测SOCS-1 信号蛋白的表达26-29
• 2.8 统计学方法29
• 3 结果29-33
• 3.1 AngⅡ对HMC细胞有效诱导浓度29-30
• 3.2 SLD对AngⅡ诱导HMC细胞增殖的影响30
• 3.3 SLD对HMC细胞IL-1β、IL-6 含量的影响30-31
• 3.4 Western blot检测SOCS-1 蛋白表达结果31-33
• 讨论33-37
• 1 本实验研究的立题依据33
• 2 关于建立细胞模型的探讨33-34
• 3 关于荔枝核的探讨34-35
• 3.1 荔枝核的文献记载34
• 3.2 荔枝核的实验研究34-35
• 4 IL-1β、IL-6 在DN发病机制中的讨论35
• 5 SOCS-1 在DN中的作用探讨35-36
• 6 实验结果的讨论36-37
• 结语37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-42

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本文编号：666350