基质-Gla蛋白对草酸钙晶体滞留的作用及机制研究

发布时间：2017-08-18 04:15

  本文关键词：基质-Gla蛋白对草酸钙晶体滞留的作用及机制研究

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【摘要】：目的：采用单一乙二醇诱导SD大鼠建立草酸钙晶体动物模型；华法林失活MGP类蛋白,探讨MGP类蛋白对大鼠草酸钙晶体滞留的影响及机制。方法： SD雄性大鼠50只分为对照组：空白对照组(TC组,n=11)、华法林对照组(WC组,n=12)及实验组：乙二醇造模组(GM组,n=12)、华法林乙二醇组(WGM组,n=15)。本实验采用0.75%乙二醇饮水诱导SD雄性大鼠形成草酸钙晶体动物模型；华法林腹腔注射干预MGP类蛋白羧化使其失活,第5天收集、分析24h尿液,第7天处死大鼠,收集血样并检测血钙、磷、肌酐、尿酸等生化指标；采用显微CT观察钙化及晶体分布特点；分别采用苏木精-伊红(HE)染色及Von-Kossa's染色钙盐染色,并使用偏光显微镜观察,人工分析计数；免疫组织化学观察草酸钙晶体肾组织MGP蛋白的定位与表达。结果：1、实验大鼠情况：实验过程大鼠死亡3只；体重增幅：WGM组、WC组较TC组显著性下降；2、血清生化检测：在尿素上：GM组、WC及WGM组相比TC显著下降,并存在统计学差异。血钙上：WC、WGM组明显低于TC、GM组并有显著差异性,余组相比无差异性。血磷、镁上各组比较未见显著差异性。3、24h尿生化：给药组24h尿肌酐略高于对照组；实验组24h尿Ca2+、UA、P明显低于对照组,实验组尿草酸明显高于对照组,对照组及实验组组间比较未见明显差异；WGM组尿Ca2+、UA、P、Ox相比TC组存在显著性差异；WGM组在Ca2+、UA、Ox上相比WC组有显著性差异；GM组在UA、P相比对照组存在显著差异；GM组在UA、P相比对照组存在显著差异,Ca2+、P上相比WC组存在显著差异性；各组尿镁未见明显统计学差异。尿枸橼酸上,TC组、GM组明显高于WC组、WGM组,WGM组相比GM组、TC组存在显著差异性,WC组相比TC组存在显著差异性,WGM组较WC组无明显差异性,GM组相比TC组无明显统计学差异性。4、肾乳头钙化的显微CT结果：TC组、WC组未见明显钙化阴影,实验组观察到有钙化阴影,且WGM组较GM组出现钙斑大鼠比例高,存在显著差异,且钙斑更明显,广泛。5、病理染色及晶体计数比较：两种染色对照组均未见钙盐染色,实验组在HE染色及Von-Kossa's染色中均发现肾小管内草酸钙晶体存在,肾小管腔扩张；人工统计每切片上晶体数目,WGM组晶体滞留数目明显高于GM组,且计数存在显著差异。6、免疫组化：TC组及WGM醇组在肾皮质和髓质肾小管上皮细胞存在广泛染色。结论：1.实验7天内成功在SD雄性大鼠体内诱导肾小管内草酸钙晶体形成及高草酸尿症、低枸橼酸尿症。2.MGP类蛋白失活对SD大鼠肾小管内草酸钙晶体形成及滞留具有明显促进作用。3.免疫组化见MGP在肾皮质及肾髓质广泛表达,正常组及草酸钙结晶组未见明显变化。
【关键词】：草酸钙结石 动物模型 华法林 晶体滞留 MGP(Macrix-Gla protein)
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R691.4
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 中英文缩略词表11-12
• 前言12-15
• 1. 泌尿系结石机制的研究意义12
• 2. MGP对尿石滞留特点的探讨12-15
• 第一部分 理论研究15-23
• 1.1 中医对尿石症的认识15-17
• 1.1.1 尿石的病因病机研究15
• 1.1.2 尿石症的辨证论治15-16
• 1.1.3 现代关于抗凝与中药活血化瘀的研究16-17
• 1.2 草酸钙结石的现代研究17-21
• 1.2.1 草酸钙结石模型的建立与探讨17-18
• 1.2.2 草酸钙结石的代谢研究18-19
• 1.2.3 草酸钙结石的形成机制研究19-21
• 1.3 肾钙素、尿凝血酶片段1类含Gla蛋白对尿石形成机制的探讨21-23
• 第二部分 实验研究23-34
• 2.1 实验材料23-24
• 2.1.1 实验动物23
• 2.1.2 实验仪器和器材23
• 2.1.3 实验制剂的制备23-24
• 2.2 实验方法24-27
• 2.2.1 实验动物分组24
• 2.2.2 实验动物24尿液采集24-25
• 2.2.3 实验动物血清采集25
• 2.2.4 采集肾脏及肾乳头标本及显微CT观察25
• 2.2.5 肾组织病理学检查及偏光显微镜检查25-26
• 2.2.6 MGP的免疫组化表达26-27
• 2.3 统计学方法27
• 2.4 实验结果27-33
• 2.4.1 实验动物死亡情况27
• 2.4.2 实验动物体重增长情况27-28
• 2.4.3 各组大鼠血清生化分析结果28
• 2.4.4 各组大鼠24h尿BUN,Cr,UA,IP,Ca2+,Ox及CA分析28-30
• 2.4.5 肾乳头的显微CT观察30-31
• 2.4.6 肾组织病理及偏光显微镜检查31-33
• 2.4.7 MGP的免疫组化表达33
• 2.5 实验结论33-34
• 第三部分 讨论34-36
• 参考文献36-40
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果40-41
• 致谢41

【参考文献】

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本文编号：692619