沉默SET8的表达对肾细胞癌恶性表型的影响及其与Wnt信号通路相关性的机制研究

发布时间：2017-08-24 20:25

  本文关键词：沉默SET8的表达对肾细胞癌恶性表型的影响及其与Wnt信号通路相关性的机制研究

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【摘要】：目的研究通过沉默人肾细胞癌中组蛋白赖氨酸甲基化转移酶SET8的表达,从而研究其对肾细胞癌恶性表型的影响,并且研究肾细胞癌中SET8与Wnt信号通路相关靶基因和靶蛋白的作用,探讨其存在的临床意义。方法1、沉默SET8的表达对肾癌细胞ACHN及786-0的增殖、凋亡、周期及侵袭转移的影响：首先构建SET8基因敲除的慢病毒载体质粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2,将其分别转染至肾癌细胞ACHN及786-0中,使肾癌细胞中SET8的表达下调。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响：采用流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。采用Transwell体外侵袭转移实验检测沉默SET8的表达对肾癌细胞侵袭转移能力的影响。2、SET8与Wnt信号通路相关基因的作用：采用coimmunoprecipitation(co-IP)免疫共沉淀实验检测肾细胞癌中SET8与Wnt相关基因TCF4和LEF1相互作用关系。3、沉默SET8的表达对Wnt信号通路相关蛋白表达的影响：用Western blot法检测沉默SET8后的肾癌细胞ACHN及786-0中Wnt信号通路的相关蛋白的表达情况。结果1、相比于对照组,ACHN和786-0两种肾癌细胞在转染了SET8基因敲除的病毒载体质粒pLKO.1/shSET8-1及pLKO.1/shSET8-2后,凋亡的细胞数目均没有明显差异(p0.05)；但是两种细胞的增殖能力在沉默SET8后明显下降(p0.01)；沉默SET8影响ACHN和786-0细胞周期,进入S期的细胞明显增多(p0.01),沉默SET8后ACHN和786-0细胞的迁移及侵袭能力均明显减弱(p0.01)。2、通过免疫共沉淀实验提示SET8可以与TCF4、LEF1相互作用(p0.05)。3、Western blot实验显示沉默SET8的ACHN和786-0细胞中cyclin D1, LEF1, Surivrin and H4K20me-1的表达明显下调(p0.01)。结论沉默SET8的表达可以影响肾细胞癌ACHN和786-0细胞的恶性表型,抑制肾肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞进入S期,使肾肿瘤细胞的侵袭转移能力减弱。SET8可以与Wnt信号通路中的相关蛋白TCF4和LEF1作用,并且沉默SET8可以使Wnt信号通路相关蛋白的表达。
【关键词】：SET8 肾细胞癌 Wnt信号通路 TCF4 LEF1
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-17
• 参考文献13-17
• 材料与方法17-28
• 一、材料与试剂17-20
• 二、试验方法20-27
• 三、统计学分析27-28
• 结果28-35
• 一、沉默SET8对肾细胞癌的增殖、凋亡、细胞周期及侵袭、转移的影响28-33
• 二、SET8与Wnt信号通路相关基因的作用33-34
• 三、沉默SET8对Wnt信号通路相关蛋白表达的影响34-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-41
• 综述41-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 韦秀望;易晓明;唐朝朋;徐振宇;梁建波;蓝志相;周文泉;;肾细胞癌组织中的组蛋白甲基化酶表达及其临床意义[J];医学研究生学报;2015年10期

2 易晓明;唐朝朋;许松;何昊玮;王龙信;张征宇;徐振宇;葛京平;周文泉;;15-氧代绣线菊内酯对转移性肾癌细胞系ACHN恶性表型的抑制作用[J];江苏医药;2015年11期

3 易晓明;许松;何昊玮;王龙信;唐朝朋;张征宇;徐振宇;葛京平;周文泉;;15-氧代绣线菊内酯对肾癌786-0细胞增殖的抑制作用[J];医学研究生学报;2014年12期

4 董杰;王龙信;唐朝朋;邢潇潇;张征宇;葛京平;秦卫军;田丰;;转化生长因子β不敏感的树突状细胞疫苗对肾细胞癌荷瘤小鼠细胞毒性T淋巴细胞的影响[J];医学研究生学报;2013年05期

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本文编号：732963