周期素依赖性蛋白激酶5过度活性与肾小球足细胞凋亡的关系研究

发布时间：2017-08-26 23:42

  本文关键词：周期素依赖性蛋白激酶5过度活性与肾小球足细胞凋亡的关系研究

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【摘要】：目的通过在肾小球足细胞中转染p25基因,探讨周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性对足细胞结构及功能的影响。方法 2014年度,于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中培养分化成熟的小鼠离体足细胞,将足细胞分为对照组、空转染组和p25转染组。应用p Ad Track-CMV病毒载体克隆p25基因,并转染足细胞,48 h收集细胞;采用Western blotting法测定Cdk5、p25、p35及细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3的表达水平;应用免疫沉淀和同位素γ-32P标记法测定Cdk5活性;足细胞免疫荧光化学染色,观察Cdk5、p35在足细胞中的表达,以及足细胞Actin的排列情况。结果 HEK293细胞Cdk5表达阳性,p35表达阴性,肾脏皮质、足细胞和肾小球中均有不同程度的Cdk5和p35的表达。对照组和空转染组p25表达阴性,p25转染组p25表达阳性。各组细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3表达水平和Cdk5活性比较,差异有统计学意义(P0.05);其中p25转染组细胞凋亡相关蛋白Cleaved caspase3表达水平和Cdk5活性高于对照组和空转染组(P0.05)。p25转染组足细胞内Actin排列紊乱,细胞形态发生异常改变,对照组和空转染组细胞内Actin排列正常,细胞形态没有发生改变。结论 p25引起Cdk5过度活性可致肾小球足细胞形态改变,Actin排列紊乱,诱发细胞凋亡。因此,Cdk5的活性在维持足细胞正常结构和功能方面发挥重要作用。
【作者单位】： 宁夏回族自治区人民医院西北民族大学医学院第一附属医院肾内科;宁夏医科大学研究生学院;
【关键词】： 足细胞 细胞周期蛋白依赖激酶 p p 细胞凋亡
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81160093,81460161) 宁夏自然科学基金资助项目(NZ14160) 宁夏科技支撑基金资助项目(2013ZYS103)
【分类号】：R692
【正文快照】： 周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)与其激活蛋白Ch EMBL公司),Lipofectamin 2000基因转染试剂、p35结合形成Cdk5/p35复合物,其活性与中枢神经系DMEM培养液(美国Invitrogen生命技术公司),胎牛血统疾病的发生、发展密切相关。在某些病理因素下,清(美国Hyclone公司)。p35被水解形成活

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本文编号：743301