尿毒症对大鼠主动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

发布时间：2017-08-29 04:43

  本文关键词：尿毒症对大鼠主动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

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【摘要】：背景:目前尿毒症发病率居高不下,大血管的病变已成为致死致残的一个重要并发症,但其机制尚不清楚,可能与离子通道信号转导异常有关。大电导钙激活钾通道(BK通道)在血管平滑肌细胞上表达丰富,对维持血管平滑肌细胞的膜电位及血管收缩和舒张的动态平衡具有重要的调节作用。尿毒症时血管重构可能与BK通道功能异常有关。目的:探讨尿毒症对大动脉平滑肌细胞BK通道的影响,阐述尿毒症大动脉损伤的分子机制。方法:(1)将各项检测基线值无显著差异的大鼠随机分为两组,尿毒症模型组采用5/6肾大部分切除法,对照组行假手术只分离肾被膜。两组大鼠均于术前和术后2、8、16、24、30、36周时化验血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),以判断大鼠模型是否建立成功,并测量鼠尾动脉收缩压(SBP)观察模型组大鼠血压的动态变化。模型构建成功后,两组大鼠左侧肾脏组织及胸腹主动脉下端进行苏木精-伊红(HE)染色法和或马松三色染色法(Masson)染色处理后用于病理分析,观察肾脏和血管结构的病理改变。(2)急性酶消化法分离大鼠胸腹主动脉得到单个平滑肌细胞后,全细胞膜片钳实验技术记录平滑肌细胞BK通道电流。(3)采用实时荧光定量PCR技术(QPCR)和Western blot技术测定大鼠胸腹主动脉平滑肌细胞BK通道亚单位的mRNA和蛋白的相对表达量。结果:(1)动物模型的验证:①肾功能:与对照组相比,模型组大鼠至少从术后第2周开始出现血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)升高,在36周时血肌酐值为(102.67±3.28)μmol/L,血尿素氮高达(24.78±5.14)mmol/L,符合造模要求。②肾脏病理变化:模型组残肾体积增大,形状不规则,镜下残肾可见肾小管及间质炎性细胞浸润,肾小管萎缩断裂扩张,肾小球硬化,肾间质纤维化。③血管病理改变:模型组大鼠主动脉壁局部增厚,平滑肌细胞增生。④SBP变化:术前两组大鼠血压无明显差异,模型组大鼠(n=15)SBP至少从术后第2周开始显著升高,第2周时对照组大鼠(n=12)血压为(113.5±3.6)mmHg,模型组大鼠血压为(128.7±5.4)mmHg,两组相比差异有统计学意义(P0.05);且随术后时间的延长,模型组血压逐步升高,在术后第8、16、24、30、36周时模型组血压值分别为(141.2±4.8)mmHg、(153.9±7.4)mmHg、(163.5±6.7)mmHg、(174.2±6.6)mmHg、(181.3±7.7)mmHg,和对照组比较后差异有统计学意义(P0.05);(2)主动脉平滑肌细胞BK通道电流变化:当刺激电压10m V时,模型组主动脉平滑肌细胞BK通道电流密度较对照组明显降低(P0.05),在刺激电压为+70m V时,电流密度分别为(199±17)p A/p F和(85±13)p A/p F(n=6);(3)BKα亚基和β1亚基m RNA的表达:应用2-ΔΔCt的计算方法,将对照组大鼠目的基因2-ΔΔCt值设定为对照值1,得出模型组大鼠的BKα亚基和BKβ1亚基mRNA的表达均较对照组明显降低(P0.05);(4)BKα亚基和β1亚基蛋白的表达:使用内参β-actin标准化,Western Blot检测发现模型组BK通道α亚基和βl亚基蛋白表达与mRNA表达趋势一致,均较对照组低(P0.05)。结论:1、5/6肾切除可以引起肾形态学和功能上的改变,而且肾脏的损伤可进一步导致系统性动脉高血压,左心室肥厚,主动脉重构,说明该模型适用于尿毒症及其心血管病并发症的研究。2、尿毒症大动脉平滑肌细胞BK通道表达下调、BK通道电流密度下降可能是尿毒症大鼠血压升高、血管重构的重要原因。
【关键词】：尿毒症 血管平滑肌细胞 BK通道
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.5
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-31
• 2.1 实验材料13-18
• 2.1.1 实验动物及分组13
• 2.1.2 主要药物及试剂13-14
• 2.1.3 实验溶液配制14-17
• 2.1.4 主要实验器械17-18
• 2.2 实验方法18-31
• 2.2.1 尿毒症动物模型的建立18-21
• 2.2.2 大电导钙激活钾通道全细胞电流的记录21-23
• 2.2.3 实时荧光定量PCR检测mRNA的表达23-27
• 2.2.4 Western Blot检测蛋白表达27-30
• 2.2.5 统计学处理30-31
• 第3章 结果31-39
• 3.1 模型的鉴定31-35
• 3.1.1 大鼠一般情况和成模率31-32
• 3.1.2 肾脏病理变化32-33
• 3.1.3 血压的变化33
• 3.1.4 尿毒症引起心脏的变化33-34
• 3.1.5 尿毒症引起主动脉的变化34-35
• 3.2 BK电流的变化35-36
• 3.3 BK通道 α 和 β1 亚基mRNA表达的变化36-37
• 3.4 BK通道 α 和 β1 亚基蛋白表达的变化37-39
• 第4章 讨论39-43
• 第5章 结论43-44
• 致谢44-45
• 参考文献45-50
• 综述50-57
• 参考文献55-57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：751395