IL-8及IL-8R抗体抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖和迁移的研究

发布时间：2017-08-29 13:09

  本文关键词：IL-8及IL-8R抗体抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖和迁移的研究

  更多相关文章： 雄激素非依赖性前列腺癌 IL-8 IL-8抗体 IL-8R抗体 增殖 迁移

【摘要】：背景前列腺癌(Prostate cancer,PCa))是引起男性肿瘤相关性死亡的常见因素之一,PCa患者大多数被诊断时已进入晚期或发生转移,因此无法进行手术治疗。放射性治疗或联合使用雄性激素去势治疗局限性PCa的有效且安全治疗策略。但晚期或已发生转移的PCa则是致命性的,目前尚没有有效治疗手段。约30%患者经传统治疗后出现复发,90%骨髓转移患者将在2年内死亡。尤其是近年来,随着激素去势治疗的使用,越来越多的患者进展成雄激素非依赖性前列腺癌,即使肿瘤局限而未发生转移,依然给临床治疗带来极大的挑战,因此该类患者又被称做难治性前列腺癌。IL-8是一种促炎细胞因子,它在前列腺癌以及前列腺炎症患者体内高表达,与肿瘤的发生发展有着密切关系。IL-8可由前列腺癌肿瘤细胞、浸润的炎症细胞分泌,通过作用于肿瘤细胞表面IL-8受体促进细胞增殖和迁移。高迁移率族蛋白B族(HMGB)与肿瘤的发生转移密切相关。研究表明通过阻断上述细胞分泌IL-8的信号,可以终止IL-8的促肿瘤效应。但完全阻断体内IL-8分泌信号是十分困难的。本实验拟采用雄激素非依赖性前列腺癌细胞株DU145模型,探讨IL-8抗体和IL-8R抗体对细胞凋亡、增值和迁移能力的影响。有望为临床应用IL-8抗体和IL-8R抗体治疗激素非依赖性PCa提供新的靶点和理论依据。目的本课题首先通过实验验证DU145细胞能高表达IL-8;然后,进一步采用流式细胞术、MTT法、Transwell试验及免疫荧光实验探讨IL-8抗体和IL-8R抗体能加速DU145细胞凋亡,并抑制其增殖和迁移,为临床应用IL-8抗体和IL-8R抗体治疗雄激素非依赖性PCa提供新的靶点和理论依据。方法1.DU145细胞培养上清IL-8水平的检测:分别取DU145细胞培养0h、12h、24h和48h上清500ul,分为0h组(即为对照组)、12h组、24h组和48h组四个组,采用IL-8 ELISA检测试剂盒,检测不同培养时间培养上清IL-8含量。2.流式细胞术检测DU145细胞凋亡:选取DU145细胞铺板,每孔1ml,细胞浓度5×105/ml,分别加入IL-8抗体,IL-8R抗体及加入等量培养基作为对照组,即anti-IL-8组、anti-IL-8R组和Control组。24h后分别检测三组肿瘤细胞凋亡情况。3.MTT法检测DU145细胞增殖活性:应用MTT法分别检测anti-IL-8组、anti-IL-8R组和Control组肿瘤细胞增殖情况。4.Transwell试验检测DU145细胞迁移能力:应用Transwell试验分别检测anti-IL-8组、anti-IL-8R组和Control组肿瘤细胞穿过生物膜形成克隆数多少。5.免疫荧光结核激光共聚焦显微镜检测DU145细胞HMGB1蛋白表达:应用免疫荧光结核激光共聚焦显微镜检测分别检测anti-IL-8组、anti-IL-8R组和Control组肿瘤细胞HMGB1蛋白表达量。6.统计学方法:计量数据以均数加减标准差((?)+s)表示,两组间差异比较采用t检验。检验水准α=0.05,P0.05为差异有统计学意义。结果1.酶联免疫法ELISA检测IL-8浓度:0h组、12h组、24h组和48h组DU145细胞培养上清IL-8浓度分别为(0.03±0.02)ng/ml、(1.21±0.05)ng/ml、(3.10±0.05)ng/ml、(3.91±0.06)ng/ml。各组之间均有统计学差异(均有P0.001)。2.流式细胞术检测DU145细胞凋亡率:结果显示与空白对照组相比,DU145细胞经IL-8/IL-8R刺激后凋亡率分别为(9.92±1.02)%和(10.34±1.07)%,均比空白对照组(1.60±0.37)%,且有统计学差异(T=21.2,P0.001;T=12.5,P0.001)。3.MTT法检测DU145细胞增殖活性:加入IL-8抗体和IL-8R抗体后DU145细胞克隆形成减少,分别为(1.31±0.10)和(1.07±0.14),两组OD值均显著低于空白对照组(3.02±0.08),且有统计学差异(T=9.3,P0.001;T=5.4,P0.001)。4.Transwell检测DU145细胞迁移能力:加入IL-8抗体组或IL-8R抗体组细胞穿过生物膜形成克隆数分别为(49.67±3.54)个、(49.83±3.44)个,均低于未加抗体的空白对照组克隆个数(164.83±4.63)个,且有统计学差异(T=19.3,P0.001;T=9.3,x±sP0.001)。5.免疫荧光检测DU145细胞HMGB1蛋白表达:未加抗体的空白对照组细胞呈现梭形较多,胞质丰富,HMGB1表现为红色大颗粒状或小块状。而加入IL-8/IL-8R抗体后,细胞多呈现圆形,胞质减少,HMGB1表达信号弱,仅呈现微粒状或粉尘状。结论1.培养雄激素非依赖性前列腺癌DU145细胞时细胞可分泌IL-8,且随时间延长,分泌量增加。2.IL-8抗体和IL-8R抗体可在体外条件下促进DU145细胞凋亡,并抑制该肿瘤细胞增殖和迁移。
【关键词】：雄激素非依赖性前列腺癌 IL-8 IL-8抗体 IL-8R抗体 增殖 迁移
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-19
• 2 结果19-24
• 3 讨论24-27
• 4 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述：前列腺癌临床诊断及治疗的研究进展32-59
• 参考文献52-59
• 附录59-60
• 在攻读学位期间发表的文章60-61
• 致谢61-62
• 个人简历62

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 李维婷;IL-8和IL-8R与牙周炎关系的研究进展[J];国外医学.口腔医学分册;2004年02期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 张永;IL-8及IL-8R抗体抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖和迁移的研究[D];新乡医学院;2016年

，

本文编号：753442