前列环素衍生物对慢性肾衰大鼠肾脏局部RAS系统关键因子表达的影响

发布时间：2017-09-03 02:28

  本文关键词：前列环素衍生物对慢性肾衰大鼠肾脏局部RAS系统关键因子表达的影响

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【摘要】：目的:建立慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠模型,研究前列环素(Prostacyclin,PGI2)衍生物对CRF大鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)系统关键因子血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)、血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]、血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)表达的影响,研究前列环素衍生物对CRF的可能保护机制。方法:行5/6肾切除建立大鼠CRF模型。将大鼠随机分为假手术组即对照组、CRF模型组和前列环素衍生物治疗组,每组均10只。5周后检测各组大鼠血清肌酐(Serum creatinine,Scr)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN),并随机取各组大鼠一只行肾脏组织病理切片染色观察肾组织病理改变,判断大鼠模型是否建立成功。治疗组第5周开始给予前列环素衍生物贝前列腺素钠(Beraprost sodium,BPS)0.6mg/kg/d,分两次灌入,共4周。模型组和对照组大鼠给予等量蒸馏水。第9周时对全部大鼠进行处死。观察以下指标:1.药物干预前后大鼠24h尿蛋白总量、血肌酐、尿素氮值变化;2.三组大鼠肾组织苏木精-伊红(HE)染色法和马松三色染色法(Masson)的病理表现;3.实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR,q RT-PCR)、.Western blot、免疫荧光检测第9周时肾组织中ACE2、AT1m RNA及蛋白浓度变化;4.酶联免疫法吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测第9周肾组织中Ang Ⅱ、Ang-(1-7)浓度及血清中5周、9周时ACE2、Ang Ⅱ、Ang(1-7)、AT1的浓度变化;结果:(1)动物模型的验证:肾功能:模型组Scr、BUN显著上升;24小时尿蛋白排泄量明显升高;肾脏病理组织变化:肾小球系膜细胞肥厚,小管-间质明显纤维化伴炎症细胞浸润,可见蛋白管型。这些生化及肾脏病理均提示建模成功。经过BPS治疗4周后,治疗组肾小球系膜细胞增生、肾小管-间质纤维化、炎症细胞浸润程度较模型组均明显减轻。(2)整个实验期间,对照组24h尿蛋白、Scr、BUN均无明显变化;与对照组相比,5周时模型组、治疗组24h尿蛋白、Scr、BUN均增加(P0.05);与模型组(5周时)相比,9周时模型组Scr、BUN下降(P0.05),24小时尿蛋白总量上升(P0.05);治疗组经过BPS灌胃4周后(9周),与5周时治疗组相比,24h尿蛋白下降(P0.05),而Scr、BUN水平未见明显变化。(3)9周时肾组织实时荧光定量PCR(Real time RT-PCR,q RT-PCR)、Western blot,免疫荧光结果显示:与对照组相比,模型组大鼠肾组织ACE2表达下调(P0.05),AT1表达上调(P0.05);与模型组相比,治疗组ACE2表达上调(P0.05),AT1表达下调(P0.05)。(4)ELISA结果显示:肾脏:与对照组相比,9周时模型组大鼠Ang Ⅱ浓度明显增加(P0.01),Ang(1-7)浓度显著下降(P0.01);与9周时模型组相比,9周时治疗组Ang Ⅱ浓度减少(P0.05),Ang(1-7)浓度显著增加(P0.01);血清:对照组、模型组5周、9周时组内Ang Ⅱ、Ang(1-7)、ACE2、AT1浓度均无明显变化(P0.05)。与对照组相比,5周时模型组、治疗组大鼠Ang Ⅱ、AT1浓度增加(P0.05),Ang(1-7)、ACE2浓度下降(P0.05),其中模型组、治疗组相比无明显差异(P0.05);与5周时治疗组相比,经过BPS干预4周后(9周)治疗组,Ang Ⅱ浓度减少(P0.05)、Ang(1-7)浓度增加(P0.05),而AT1、ACE2浓度未见明显变化(P0.05);结论:前列环素衍生物能延缓CRF大鼠模型的病情进展,其机制可能通过调控肾脏局部RAS系统关键因子Ang Ⅱ、ACE2、Ang(1-7)、AT1起作用外,还可能通过减少尿蛋白来实现。
【关键词】：慢性肾衰竭 前列环素 AngⅡ Ang(1-7) ACE2 AT1
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.5
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料与方法15-28
• 2.1 材料15-17
• 2.1.1 实验动物及饲养条件15
• 2.1.2 主要试剂和材料15-16
• 2.1.3 主要设备和仪器16-17
• 2.2 实验方法17-27
• 2.2.1 慢性肾衰大鼠模型的建立及分组17
• 2.2.2 慢性肾衰大鼠模型成功标准及标本的收集与处理17-18
• 2.2.3 肾组织病理检测18-19
• 2.2.4 免疫荧光检测ACE2、AT1的表达19-20
• 2.2.5 实时荧光定量PCR检测ACE2、AT1mRNA水平的表达20-22
• 2.2.6 Western Blot检测ACE2、AT1蛋白表达22-26
• 2.2.7 酶联免疫吸附检测肾组织Ang Ⅱ、Ang（1-7）浓度及血清中ACE2、AT1、Ang（1-7）、AT1的浓度26-27
• 2.3 统计学处理27-28
• 第3章 结果28-38
• 3.1 生化指标检测28-29
• 3.2 肾脏病理学改变29-30
• 3.3 免疫荧光检测9周时肾组织ACE2、AT1蛋白的表达30-32
• 3.3.1 免疫荧光检测9周时肾组织ACE2蛋白的表达30-31
• 3.3.2 免疫荧光检测9周时肾组织AT1蛋白的表达31-32
• 3.4 Western-Blot检测肾脏ACE2、AT1浓度的表达32-33
• 3.5 实时荧光定量PCR检测肾脏ACE2、AT1mRNA表达的变化33-35
• 3.6 双抗夹心ELISA法检测肾组织Ang Ⅱ、Ang(1-7)的浓度和血清中Ang Ⅱ、Ang(1-7)、ACE2、AT1的浓度变化35-38
• 3.6.1 肾脏组织中Ang Ⅱ、Ang(1-7)的浓度变化35
• 3.6.2 血清中Ang Ⅱ、Ang(1-7)、ACE2、AT1的浓度变化35-38
• 第4章 讨论38-43
• 第5章 结论与展望43-44
• 5.1 结论43
• 5.2 展望43-44
• 致谢44-45
• 参考文献45-49
• 综述49-55
• 参考文献54-55

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本文编号：782354