miR-451在膀胱癌侵袭转移中的作用机制研究及其靶基因预测

发布时间：2017-09-12 19:48

  本文关键词：miR-451在膀胱癌侵袭转移中的作用机制研究及其靶基因预测

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【摘要】：目的:通过检测mi R-451在膀胱癌组织和膀胱癌细胞中的表达,分析其与临床病理特征及转移潜能的相关性,以验证mi R-451是否为膀胱癌潜在的抑癌基因;体外实验探寻mi R-451对膀胱癌细胞粘附、二维迁移及侵袭能力的影响,阐明它在膀胱癌侵袭转移中的作用机制,并预测mi R-451的可能下游靶基因。方法:收集自2011年1月至2014年12月间我院行根治性全膀胱切除术后的临床标本30例,采用q RT-PCR检测mi R-451在膀胱癌组织、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性;检测膀胱癌细胞T24、5637、J82中mi R-451的表达,分析其与细胞转移潜能的相关性。构建mi R-451过表达的细胞模型,采用粘附实验、划痕实验、Transwell实验探寻mi R-451对膀胱癌细胞粘附、二维迁移及侵袭能力的影响,并通过Target Scan、mir Base等生物信息学软件预测、筛选mi R-451的可能下游靶基因。结果:1、基因表达检测结果显示:①mi R-451在膀胱癌组织中较癌旁及正常膀胱组织中显著低表达(P0.05);mi R-451在癌旁组织中较正常膀胱组织中显著低表达(P0.05)。②mi R-451在高分期(T3、T4)的膀胱癌组织中较在低分期(如T1、T2)膀胱癌组织中显著低表达(P0.05);mi R-451在高分化膀胱癌组织中较在低分化膀胱癌组织中显著高表达(P0.05)。③mi R-451在J82中较在T24、5637中高表达,且其表达水平与细胞株转移潜能负相关(P0.05)。2、①转染效率检测提示mi R-451mimics及scramble序列在三个转染细胞组中的转染效率都达90%以上,转染效果好,符合后续实验要求。②粘附实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组细胞OD值低(P0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱癌细胞的粘附能力。③划痕实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组细胞迁移距离短(P0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱癌细胞的二维迁移能力。④Transwell实验结果显示:mi R-451过表达组较阴性对照组及空白对照组侵袭细胞总数少(P0.05),而阴性对照组及空白对照组差异不显著(P0.05);说明mi R-451过表达可减弱膀胱肿瘤细胞的侵袭能力。3、预测mi R-451可能的下游靶基因为CAB39、MIF、RAB14、ABCB1等。结论:1、mi R-451在膀胱癌组织及癌旁组织较在正常膀胱组织中显著低表达,提示mi R-451可能与膀胱癌的发生、演变及进展密切相关,有可能为膀胱癌的早期诊断及其分子靶向治疗提供新的切入点。2、mi R-451的表达水平和膀胱癌临床分期及病理分级呈负相关,有可能成为膀胱癌新的预后指标。3、mi R-451的过表达可减弱膀胱癌细胞的粘附、二维迁移及侵袭能力。4、生物学信息软件分析并预测mi R-451的可能下游靶基因是CAB39、MIF、RAB14、ABCB1等,可为膀胱癌靶向分子相关研究提供新的切入点。
【关键词】：miR-451 膀胱癌 侵袭 转移 靶基因预测
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要3-5
• abstract5-10
• 英文缩略词表10-11
• 引言11-15
• 1 阐述MICRORNA在肿瘤发生发展过程中起到非常重要的作用11-12
• 2 阐述MICRORNA在膀胱癌发生及演变中的重要调控意义12-13
• 3 阐明MIR-451 与恶性肿瘤的侵袭及转移密切相关13-15
• 第一部分：MIR-451 异常表达与膀胱癌临床病理特征相关性分析15-27
• 1 材料与方法15-22
• 1.1 组织标本、细胞与分组15
• 1.2 主要仪器15-16
• 1.3 主要试剂16-17
• 1.4 实验方法17-22
• 1.5 数据收集及统计分析22
• 2 结果22-25
• 2.1 总RNA完整性、纯度及PCR实验检测22-23
• 2.2 miR-451 在不同阶段膀胱癌组织及癌旁正常组织中的差异表达23-24
• 2.3 miR-451 在不同转移潜能膀胱癌细胞中的差异表达24-25
• 3 讨论25-27
• 第二部分：MIR-451 对膀胱癌细胞粘附、迁移及侵袭能力的影响27-38
• 1 材料与方法27-31
• 1.1 细胞与分组27
• 1.2 主要仪器27-28
• 1.3 主要试剂28
• 1.4 实验方法28-31
• 1.5 统计学处理31
• 2 结果31-36
• 2.1 转染效率的检测31
• 2.2 miR-451 抑制膀胱癌细胞的粘附能力31-32
• 2.3 miR-451 抑制膀胱癌细胞的二维迁移能力32-34
• 2.4 miR-451 抑制膀胱癌细胞的侵袭能力34-36
• 3 讨论36-38
• 第三部分：MIR-451 靶基因的生物信息学预测38-44
• 1 材料与方法38
• 1.1 生物信息软件系统38
• 1.2 方法38
• 2 结果38-41
• 2.1 经mirBase查询结果38-39
• 2.2 TargetScan分析结果39-40
• 2.3 miRTarbase查询结果40-41
• 3 讨论41-44
• 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-50
• 攻读学位期间的研究成果50-51
• 综述51-59
• 参考文献56-59
• 附录59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：839199