miR-27a对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

发布时间：2017-09-13 08:24

  本文关键词：miR-27a对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

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【摘要】：前列腺癌是世界范围内最为高发的男性癌症之一,其中在发达国家更为普遍。在我国,前列腺癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤。伴随着人民生活质量的提升以及针对前列腺癌的诊断技术的逐步普及,其发病率也呈逐年上升的趋势。尽管雄激素剥夺治疗在治疗之初显示一定的疗效,但大部分患者最终死于癌症的复发和转移,因此,探讨影响前列腺癌转移的相关因子将对前列腺癌的治疗具有潜在的指导意义。mi RNAs作为一种小非编码的RNA,是近些年的研究热点。伴随着研究的逐渐深入,发现mi RNAs能够通过靶向抑制其靶基因在肿瘤的许多生物学过程中发挥重要地作用。其中由于mi R-27a在乳腺癌中异常的高表达,而被认为具有癌基因的功能,并能够促进肿瘤细胞的转移。而mi R-27a前列腺癌中的存在这种异常高表达的现象,因此mi R-27a可能与前列腺癌的转移相关。蛋白酶体抑制剂是一种在肿瘤治疗过程中常用的抗癌药物,其通过对蛋白酶体的抑制进而达到抗肿瘤的作用。本课题通过RT-PCR检测五种前列腺癌细胞中内源性mi R-27a的表达水平,证明mi R-27a的表达水平与前列腺癌细胞的转移水平呈正相关。接着检测mi R-27a对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,证明mi R-27a能够促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭。另外,利用在线软件对mi R-27a的靶基因进行了预测,并利用RT-PCR和Western Blot筛选出mi R-27a的一个新靶基因—具有调控细胞转移能力的MARCKS。为以后对分子机制的进一步研究打下基础。本课题通过一系列的实验证明了mi R-27a能够促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭,并筛选出mi R-27a的一个新的靶基因MARCKS。同时雷公藤红素与mi RNA表达图谱分析结果显示蛋白酶体抑制剂雷公藤红素能够抑制mi R-27a的表达,进一步证明雷公藤红素能够抑制前列腺癌的迁移和侵袭。我们的实验结果为进一步阐明mi R-27a在前列腺癌发生和发展过程中所起的作用提供了宝贵的实验依据。
【关键词】：前列腺癌 mi R-27a 迁移 侵袭 MARCKS
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 绪论8-22
• 1.1 课题背景及研究的目的和意义8-9
• 1.2 前列腺癌的研究进展9-14
• 1.2.1 前列腺癌的流行病学分析9-10
• 1.2.2 前列腺癌转移的分子机制10-12
• 1.2.3 前列腺癌的诊断及治疗研究进展12-14
• 1.3 miRNA的研究进展14-19
• 1.3.1 miRNA简介15
• 1.3.2 miRNA在前列腺癌中的研究进展15-18
• 1.3.3 miR-27a与肿瘤的转移18-19
• 1.4 蛋白酶体抑制剂抗肿瘤的研究19-20
• 1.5 本课题的主要研究内容20
• 1.6 技术路线20-22
• 第2章 材料与方法22-34
• 2.1 实验材料与试剂22-23
• 2.1.1 实验材料22
• 2.1.2 实验试剂22-23
• 2.2 实验设备23-24
• 2.3 实验方法24-34
• 2.3.1 细胞培养24
• 2.3.2 细胞转染24-25
• 2.3.3 质粒提取 (大提)25-26
• 2.3.4 血液DNA提取26-27
• 2.3.5 细胞总蛋白提取以及蛋白浓度的测定27-28
• 2.3.6 Western blotting28-29
• 2.3.7 Western blotting膜的Stripping29
• 2.3.8 RNA提取29-30
• 2.3.9 miRNA的提取30-31
• 2.3.10 miRNA加尾31
• 2.3.11 RT-PCR31-32
• 2.3.12 实时定量PCR反应32-33
• 2.3.13 划痕实验33
• 2.3.14 Transwell实验33-34
• 第3章 miR-27a对前列腺癌细胞的影响34-43
• 3.1 引言34
• 3.2 前列腺癌细胞中内源性mi R-27a的表达水平检测34-35
• 3.3 miR-27a在乳腺癌和肺腺癌中的表达水平35-37
• 3.4 miR-27a对前列腺癌细胞迁移的影响37-40
• 3.5 miR-27a对前列腺癌细胞侵袭的影响40-41
• 3.6 本章小结41-43
• 第4章 miR-27a靶基因的预测、筛选和初步鉴定43-50
• 4.1 引言43
• 4.2 miR-27a靶基因的预测与筛选鉴定43-47
• 4.3 在乳腺癌和肺癌细胞系中mi R-27a对其靶基因的蛋白水平的影响47
• 4.4 雷公藤红素对mi R-27a的影响47-48
• 4.5 本章小结48-50
• 讨论50-51
• 结论51-52
• 展望52-53
• 参考文献53-61
• 攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果61-63
• 致谢63

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