高糖通过下调肾小管上皮细胞PTEN表达促进纤维化病变的机制及药物干预研究

发布时间：2017-09-13 10:11

  本文关键词：高糖通过下调肾小管上皮细胞PTEN表达促进纤维化病变的机制及药物干预研究

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【摘要】：目的:本研究旨在观察高糖对肾小管上皮细胞PTEN和PI3K/Akt信号通路以及EMT相关指标蛋白的表达变化的影响,同时进一步探讨洛伐他汀对高糖培养的肾小管上皮细胞中PTEN和PI3K/Akt信号通路表达变化的影响及在肾小管纤维化病变中的作用及可能机制。方法:培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E),应用免疫酶细胞化学、免疫荧光细胞化学检测上皮细胞标志性蛋白角蛋白CK-18、钙黏蛋白(E-cadherin)和间质细胞标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)鉴定所培养细胞;MTT实验检测洛伐他汀对NRK52E生长活性的影响。细胞传代后随机分三组:(1)正常糖(NG)对照组:2%FBS+DMEM(含糖5.5mmol/L)培养;(2)高糖(HG)组:2%FBS+19.5mmol/L D-glucose+DMEM(含糖5.5mmol/L)培养;(3)高糖+洛伐他汀(HR)组:2%FBS++19.5mmol/L D-glucose+DMEM(含糖5.5 mmol/L)+洛伐他汀(10u M)培养,各组细胞分别培养2h,12h,24h和48h四个时间点后收集蛋白和RNA进行观察;Western blotting检测各组肾小管上皮细胞中PTEN、p-Akt(ser473)、E-cadherin、α-SMA和胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ,Col-Ⅳ)蛋白表达;Real-time PCR技术检测PTEN m RNA的表达。结果:(1)细胞鉴定结果显示为肾小管上皮细。(2)MTT实验结果显示0-50u M浓度的洛伐他汀对细胞生长无明显影响,根据参考文献及MTT实验结果选定适合浓度(10u M)对细胞进行干预。(3)与NG组比较,HG处理12h、24h和48h时PTEN m RNA及蛋白表达明显减少(P0.05),并随HG处理时间的延长为进行性减少,p-Akt(ser473)蛋白表达明显增多(P0.05),E-cadherin蛋白表达减少(P0.05),α-SMA蛋白表达显著增多(P0.05),Col-Ⅳ沉积增多;予以洛伐他汀干预后,与高糖组比较,洛伐他汀可上调PTEN m RNA及蛋白表达水平(P0.05),可下调p-Akt(ser473)、α-SMA、Col-Ⅳ蛋白表达水平(P0.05)。结论:高糖可诱导肾小管上皮细胞发生EMT,洛伐他汀对高糖诱导肾小管上皮细胞的EMT过程有明显抑制作用,其作用机制可能与上调PTEN表达,抑制Akt的活化,进而阻断PI3K/Akt信号通路有关。
【关键词】：肾小管上皮细胞 高糖 洛伐他汀 第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN) p-Akt(Ser473) α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) E-钙黏素(E-cadherin)
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略缩词表9-11
• 引言11-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-44
• 综述44-52
• 参考文献49-52
• 作者简历52-53
• 致谢53-54
• 学位论文数据集54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：843088