稳转GFP-RAB7的肾小管上皮细胞在缺氧状态下RAB7的表达及位置变化

发布时间：2017-09-13 11:19

  本文关键词：稳转GFP-RAB7的肾小管上皮细胞在缺氧状态下RAB7的表达及位置变化

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【摘要】：目的:了解缺氧状态下RAB7蛋白在稳转GFP-RAB7表达载体的肾小管上皮细胞中的表达及位置变化,验证其对细胞自噬与内吞现象的指示作用。方法:构建GFP-RAB7表达融合蛋白慢病毒载体转染肾小管上皮细胞(HK-2),缺氧处理后,采用RT-qPCR、蛋白质印迹技术和激光共聚焦技术检测外源基因RAB7在细胞内的表达及位置的变化。结果:成功将GFP-RAB7基因的表达载体转染到HK-2细胞中,并获得稳定表达GFP-RAB7蛋白的HK-2细胞;在缺氧状态下,RAB7 mRNA的表达轻微降低,蛋白水平没有变化;激光共聚焦显微镜发现GFP-RAB7蛋白发生聚集,显示自噬与内吞的形成。结论:成功建立稳定转染的表达GFPRAB7的HK-2细胞系,GFP-RAB7融合蛋白可指示自噬与内吞现象,为研究缺氧状况下肾小管上皮细胞自噬与内吞提供了有效工具。
【作者单位】： 东南大学医学院;
【关键词】： 缺氧 GFP-RAB蛋白 肾小管上皮细胞 自噬 内吞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81370868) 中央高校基本科研业务费专项资金项目 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目(KYLX_0197)
【分类号】：R692
【正文快照】： 2000年Fine等[1]提出慢性缺氧假说,强调肾小管间质的慢性缺血损伤是各种肾脏病发展为终末期肾病的共同通路。研究表明,肾小管上皮细胞对缺氧十分敏感,易因此而损伤并释放炎症介质,促进疾病的发展,但具体机制尚未完全搞清[2-3]。自噬(autophagy)是一种细胞代谢方式,细胞将自身

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本文编号：843390