TRPC6在TGF-β1诱导的体外培养肾小球足细胞损伤中的表达及其高表达对nephrin、desmin表达的影响

发布时间：2017-09-14 02:43

  本文关键词：TRPC6在TGF-β1诱导的体外培养肾小球足细胞损伤中的表达及其高表达对nephrin、desmin表达的影响

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【摘要】：目的体外研究经典瞬时受体电位通道6(TRPC6)在TGF-β1诱导的肾小球足细胞损伤中的表达变化及其高表达对足细胞nephrin、desmin表达的影响。方法以肾小球足细胞株(MPC5)为研究对象,以不同质量浓度(0、4、8、12 ng/ml)TGF-β1刺激足细胞,干预72 h后用免疫荧光、Real-time PCR、Wstern blot检测TRPC6的分布及m RNA和蛋白表达。再将MPC5细胞分组,应用12 ng/ml TGF-β1处理各组细胞,分别于0、24、48、72 h应用免疫荧光、Real-time PCR、Western blot检测TRPC6的分布及m RNA和蛋白表达。用脂质体法将小鼠TRPC6真核表达载体p EX-3-TRPC6及对照质粒空载体p EX-3-NC转染足细胞,48 h后应用Western blot检测转染后TRPC6蛋白水平评估传染效率;同时应用免疫荧光、Real time RT-PCR及Western印迹方法检测转染后nephrin、desmin分布及表达的变化。结果与正常对照组相比,倒置显微镜下TGF-β1干预后足细胞足突融合、回缩,当TGF-β1增加至16 ng/ml时足突甚至消失。TGF-β1作用能使足细胞TRPC6表达及分布发生变化,当TGF-β1质量浓度为4 ng/ml,干预72 h后与对照组相比TRPC6 m RNA和蛋白含量即升高,但差异无统计学意义,当TGF-β1质量浓度提高到为8、12 ng/ml时TRPC6 m RNA和蛋白含量明显升高(P0.05),并呈剂量依赖性。应用12 ng/ml干预24 h,与对照组相比,TRPC6m RNA和蛋白含量即升高,但差异无统计学意义,当干预时间延长至48、72 h时TRPC6 m RNA和蛋白含量明显升高(P0.05),并呈时间依赖性。p EX-3-TRPC6转染48 h后足细胞TRPC6蛋白表达水平明显增高(P0.05),nephein分布未发生变化,但表达量在m RNA及蛋白水平分别下降25%及42%左右(P0.05),desmin分布发生改变,表达量在m RNA及蛋白水平分别升高132%及116%左右(P0.05)。结论 TGF-β1可诱导足细胞TRPC6分布变化且表达上调,TRPC6高表达可影响nephrin、desmin表达及desmin的分布,这可能是TRPC6参与足细胞损伤的机制之一。
【作者单位】： 右江民族医学院附属医院肾内科;
【关键词】： 足细胞 TGF-β TRPC Nephrin Desmin
【基金】：广西自然科学基金(2014GXNSFAA118269)
【分类号】：R692
【正文快照】： 足细胞(终末分化期肾小球上皮细胞)对维持肾小球结构完整性和滤过功能起重要作用,而裂孔隔膜是足细胞发挥滤过功能的关键部位,越来越多证据表明足细胞损伤是导致蛋白尿和肾小球硬化症的关键因素[1]。TRPC6(transient receptor potential cationchannel,subfamily C,member 6)

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本文编号：847402