OTUB1基因对于膀胱癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-09-15 01:08

  本文关键词：OTUB1基因对于膀胱癌细胞生物学行为的影响

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【摘要】：目的:本论文通过研究OTUB1基因在膀胱癌发生及发展过程中的作用,从而进一步阐明OTUB1基因与人类肿瘤的关系。方法:1、检测OTUB1基因在膀胱癌肿瘤组织及癌旁组织中含量的高低及其表达差异。首先通过实时定量PCR技术检测OTUB1基因在膀胱肿瘤组织及癌旁组织的含量差异,然后通过免疫组化技术研究探究膀胱癌组织与癌旁组织中OTUB1的表达差异。2、探究OTUB1基因对膀胱癌肿瘤细胞行为学方面的影响:分别构建OTUB1基因过表达质粒和干扰质粒,并稳定转染膀胱癌肿瘤细胞株,通过western blot验证OTUB1基因在上述细胞株中的表达高低;然后采用CCK-8法检测OTUBl基因过表达、干扰细胞与对照组细胞增殖能力的差异,并采用Transwell小室来探究其迁移能力差异,采用Matrigel胶穿实验来探究不同稳定转染细胞株侵袭能力的差异。结果:1、测定膀胱癌肿瘤组织与其配对的癌旁组织中OTUB1m RNA的表达量,发现癌变组织中的OTUB1m RNA的表达量较癌旁组织要高4.37倍(P0.05)。通过免疫组织化学技术分析,与其相应的癌旁组织相比,OTUB1基因在膀胱癌癌变组织中的蛋白表达量显著增高,差异具有统计学意义(P0.05);OTUB1基因的蛋白表达水平与淋巴结转移与否、肿瘤的大小及肿瘤的病理分级密切相关,且差异显著(P0.05)。2、OTUB1基因的过表达可引起膀胱癌肿瘤细胞的增殖,细胞迁移和侵袭能力的增强。而OTUB1基因被干扰时,可引起膀胱癌肿瘤细胞在体外的增殖、迁移及侵袭能力的减弱。本研究首次从细胞行为学的角度,研究OTUB1基因对膀胱癌肿瘤细胞生物学行为的影响,构建了OTUB1基因过表达与干扰的膀胱癌肿瘤细胞系,探讨肿瘤的增殖能力,侵袭能力,迁移能力与OTUB1表达情况的相关性,为进一步研究OTUB1基因及其表达产物在与肿瘤发生发展相关的信号通路上所发挥的作用,奠定了坚实的基础。本研究旨在寻找一种膀胱癌早期诊断的新的潜在标志物,对患者的病灶大小,淋巴结转移与否等临床情况进行预判,同时寻找一种潜在的膀胱癌生物学治疗靶点。结论:在膀胱癌肿瘤组织中,OTUB1的m RNA与蛋白水平均呈现高表达特点;OTUB1基因具有促进肿瘤组织细胞的增殖、迁移与侵袭的能力。OTUB1在膀胱癌的发生、发展与转移过程中发挥了十分重要的正性作用。
【关键词】：膀胱癌 OTUB1表达差异 生长 迁移 侵袭
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-15
• 一、OTUB1基因在膀胱癌组织中的表达程度15-25
• 1.1 对象和方法15-19
• 1.1.1 研究对象15
• 1.1.2 主要实验试剂及配制15-16
• 1.1.3 设备和仪器16
• 1.1.4 总RNA的抽提16
• 1.1.5 总RNA逆转录16-17
• 1.1.6 实时定量PCR检测17-18
• 1.1.7 OTUB1 蛋白在膀胱癌组织中表达情况的探究18-19
• 1.2 结果19-22
• 1.2.1 OTUB1 mRNA 在膀胱癌组织及其相应癌旁组织的表达情况19-21
• 1.2.2 通过免疫组化探究OTUB1在膀胱癌标本中的含量21-22
• 1.3 讨论22-24
• 1.4 小结24-25
• 二、OTUB1 基因对膀胱肿瘤细胞行为学的影响25-50
• 2.1 对象和方法25-37
• 2.1.1 膀胱细胞株25
• 2.1.2 菌株25
• 2.1.3 主要试剂25-26
• 2.1.4 主要试剂、培养基的配制26
• 2.1.5 主要设备与仪器26-27
• 2.1.6 OTUB1 mRNA 在不同膀胱癌细胞株中的表达情况27-28
• 2.1.7 感受态细菌的制备28
• 2.1.8 质粒抽提28-29
• 2.1.9 OTUB1 过表达的 T24 细胞株的构建29-31
• 2.1.10 转染效率的测定31-33
• 2.1.11 OTUB1 基因被干扰的 EJ 细胞株的建立33-34
• 2.1.12 OTUB1干扰效率的测定34-36
• 2.1.13 OTUB1 对于膀胱癌细胞株生物学特性的影响36-37
• 2.2 结果37-46
• 2.2.1 OTUB1基因在两种膀胱癌细胞株中的含量测定结果37-38
• 2.2.2 OTUB1 基因过表达及其被干扰的稳定细胞株的制备38-40
• 2.2.3 OTUB1 基因过表达对膀胱肿瘤细胞生物学行为的作用40-43
• 2.2.4 OTUB1 基因的干扰对膀胱肿瘤细胞生物学行为的作用43-46
• 2.3 讨论46-49
• 2.4 小结49-50
• 结论50-51
• 问题的展望51-53
• 发表论文和参加科研情况说明53-54
• 参考文献54-57
• 综述 OTUB1基因与肿瘤的关系研究进展57-68
• 综述参考文献63-68
• 致谢68-69
• 个人简历69

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本文编号：853400