糖尿病大鼠肾组织Nrf2、HO-1的表达及富氢液对其干预作用的研究

发布时间：2017-09-17 02:22

  本文关键词：糖尿病大鼠肾组织Nrf2、HO-1的表达及富氢液对其干预作用的研究

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【摘要】：目的:糖尿病肾病是糖尿病最常见、最严重的慢性并发症之一,其具体发病机制尚未完全阐明,但大量研究表明,糖尿病持续的高糖状态诱导产生的大量活性氧(Reactive oxygen species,ROS)可直接攻击体内大分子物质,产生过氧化变性、交联或断裂,导致细胞结构和功能损伤,从而促使糖尿病肾病的发生、发展。当机体应对ROS损伤时,某些保护性基因上游调节区的抗氧化反应元件(Anti-oxidative response element,ARE)会调控表达一系列保护性蛋白,以缓解细胞损伤。研究发现,ARE可被细胞内调节抗氧化应激反应的重要转录因子Nrf2激活。Nrf2/ARE通路是维持细胞内氧化还原平衡的主要内源性通路。因此,Nrf2的激活及下游抗氧化蛋白的表达可能为糖尿病肾病的防治提供新的靶点。本研究拟建立糖尿病大鼠模型,并给予富氢液进行干预,测定肾组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽(glutathione hormone,GSH)水平及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性反应糖尿病大鼠肾脏氧化应激程度;应用免疫组织化学、Western blot方法检测肾组织中Nrf2、HO-1的表达情况。探讨富氢液是否能通过激活Nrf2/ARE通路改善肾组织内的氧化应激状态,以期为糖尿病肾病的防治提供新的理论依据。方法:选择SPF级健康雄性大鼠36只,体重约200±20g,适应性喂养1周后,空腹12小时,随机选取12只,作为正常组(NC组),其余24只建立糖尿病大鼠模型,分别给予STZ(65mg/Kg)腹腔注射,72小时后尾尖取血测血糖,血糖≥16.7mmol/L即为造模成功。NC组给予等量的柠檬酸缓冲液腹腔注射。糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组(DM组)、富氢液干预组(HRS组)。HRS组给予12ml/kg HRS灌胃,NC组、DM组每天给予等量生理盐水灌胃。实验期间大鼠自由进食、饮水,不使用胰岛素及其他降糖药物。分别于造模成功8周末、12周末,每组任取6只大鼠,留取血、尿标本,检测血肌酐、血尿素氮及24小时尿蛋白;并取肾组织,制作病理切片,进行苏木素伊红(HE)染色及糖原染色(PAS),观察肾组织病理变化;应用免疫组织化学方法及Western blot方法检测Nrf2、HO-1的表达情况。取部分肾皮质制备匀浆液,测定MDA、GSH水平及SOD活性。实验所得数据用均数±标准差(?x±S)表示,应用SPSS20.0统计分析软件对数据进行单因素方差分析,若数据不满足正态性或方差齐性则采用非参数检验,以p0.05有统计学意义。结果:1大鼠一般情况NC组大鼠精神状态良好,体重增加,反应灵敏,毛发有光泽,尿量无明显改变。DM组及HRS组自造模成功后,逐渐出现多饮、多食、多尿等糖尿病症状,后期精神萎靡,反应迟钝,毛发晦暗且逐渐消瘦。其中DM症状明显重于HRS组。2生化指标8周末和12周末,DM组和HRS组24小时尿蛋白、血糖、血肌酐、血尿素氮水平较NC组升高(P0.05);HRS组与DM组相比明显降低(P0.05)。3氧化应激指标DM组大鼠肾组织内MDA含量与NC组相比明显升高,给予富氢液干预后,MDA水平降低(P0.05);DM组大鼠肾组织内SOD活性、GSH水平与NC相比明显降低,给予富氢液干预后,SOD活性、GSH水平升高(P0.05)。4肾脏形态学改变光镜显示,NC组大鼠的肾脏组织结构清晰,未见明显的病理学改变;DM组部分肾小球体积增大,肾小球系膜基质弥漫增多,系膜细胞增生,系膜区增宽,基底膜增厚,部分部位出现肾小管扩张,部分肾小管上皮细胞出现空泡变性。12周末上述病理改变最明显,给予富氢液治疗后,肾脏病变有所减轻。5 Nrf2、HO-1的表达免疫组织化学结果显示:Nrf2、HO-1主要表达于肾小管上皮细胞胞浆中,表达强度为:HRS组DM组NC组(P0.05);Western blot结果显示:Nrf2、HO-1的表达趋势与免疫组织化学结果一致。结论:1糖尿病状态下,大鼠肾组织GSH水平、SOD活性降低,MDA含量升高,Nrf2、HO-1表达增强,说明存在明显的氧化应激反应,且Nrf2/ARE通路被激活。2富氢液可降低糖尿病大鼠血糖、血肌酐、血尿素氮及尿蛋白水平,并降低肾组织MDA含量,提高GSH水平、SOD活性,上调Nrf2、HO-1的表达,表明富氢液对肾脏具有一定的保护作用,其机制可能与激活Nrf2/ARE通路,减轻氧化应激损伤相关。
【关键词】：糖尿病肾病 氢 氧化应激 Nrf2 HO-1
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-26
• 附图26-33
• 附表33-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 参考文献40-42
• 综述 氢气对肾脏疾病的治疗作用及其研究进展42-52
• 参考文献47-52
• 致谢52-53
• 个人简历53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 贾倩;霍甜甜;冯荣芳;吴琼;王建华;;阿尔茨海默病氧化应激机制及抗氧化治疗进展[J];临床荟萃;2015年04期

2 曾葵;黄瀚;江晓琴;陈筱静;黄蔚;;氢气对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用[J];四川大学学报(医学版);2014年01期

3 谭桂梗;张士青;;富氢水对高草酸尿所致大鼠肾小管上皮损伤的保护作用研究[J];上海交通大学学报(医学版);2012年06期

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本文编号：866705