C3aR慢病毒表达载体的构建及在肾小管上皮细胞中的转染实验

发布时间：2017-09-18 09:33

  本文关键词：C3aR慢病毒表达载体的构建及在肾小管上皮细胞中的转染实验

  更多相关文章： CaR 慢病毒 肾小管上皮细胞 过表达

【摘要】：目的前期研究发现C3aR在糖尿病肾病肾小管上皮细胞中表达上调,但其在糖尿病肾病中的病理意义未知,且有关肾组织C3aR的确切生理和病理意义亦仍不清楚。文中通过构建C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的肾小管上皮细胞株,为探讨C3aR在肾组织小管上皮细胞中的确切生理和病理意义提供细胞模型。方法根据人C3aR mRNA序列合成人C3aR基因,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP;经测序验证正确后,用构建的慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293T细胞,包装成C3aR表达重组慢病毒;以C3aR表达重组慢病毒感染人肾小管上皮细胞系HK2,经药物筛选得到杀稻瘟菌素抗性细胞克隆;经荧光定量PCR分析和细胞免疫化学分析,鉴定出稳定过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株。结果 1对构建成的C3aR慢病毒表达载体p Lenti6.3-C3aR-IRES2-EGFP进行全序列测序验证显示序列完全正确。2以构建的C3aR慢病毒表达载体和包装质粒(p LP1、p LP2和p LP/VSVG)共转染293T细胞,48 h后收集细胞培养上清,得到了滴度约为5×108个/m L的慢病毒液。3成功进行了C3aR重组慢病毒对HK2细胞的转染,得到了稳定转染了C3aR重组慢病毒的HK2细胞株HK2-C3aR;基于荧光定量PCR和细胞免疫化学染色的分析证实HK2-C3aR细胞株中C3aR表达水平较HK2非转染对照细胞高(2.33±0.45 vs 1.00±0.09,P0.05)。结论成功构建了C3aR慢病毒表达载体和过表达C3aR的人肾小管上皮细胞株,为进一步研究C3aR过表达在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3aR在其他细胞中的生理、病理意义创造了条件。
【作者单位】： 南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心解放军肾脏病研究所;
【关键词】： CaR 慢病毒 肾小管上皮细胞 过表达
【基金】：国家自然科学基金(81370828)
【分类号】：R692
【正文快照】： 0引言C3aR(又称C3aR1)是补体C3裂解产物C3a的受体。在各种途径的补体活化过程中,C3被C3转化酶切割成C3b(大片段)和C3a(小片段)。C3b进一步参与补体活化的级联反应,C3a则被释放出来。长期以来,C3a主要作为一种重要的促炎因子而为人们所认识[1-4]。C3a通过激活C3aR趋化和激活白

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 胡金川;田亚平;江朝光;温新宇;高艳红;董矜;郭广宏;王玲;董振南;;红细胞补体受体1分子水平及其基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究[J];医学研究生学报;2013年07期

2 王高峰;刘芳;桑红;;真菌感染的免疫学研究进展[J];医学研究生学报;2013年08期

3 曾斌;江翠华;张吉翔;;免疫球蛋白超家族补体受体参与疾病发生的动物模型研究进展[J];医学研究生学报;2014年06期

4 郑敬民;朱小东;张明超;王建平;徐丽丽;谌达程;刘志红;;过敏毒素受体(C3aR)在db/db糖尿病肾病小鼠肾脏中的表达及病理意义分析[J];生物化学与生物物理进展;2010年08期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李伟;余舰;龙艳丽;赵敏;张国栋;;补体C3a、类胰蛋白酶与羊水栓塞关系的研究[J];重庆医学;2013年30期

2 宁昌;陈文伟;黎燕;陈国江;;补体系统与肿瘤的关系研究进展[J];国际药学研究杂志;2014年05期

3 吴国根;;206例足癣患者内外联合治疗的临床疗效分析[J];当代医学;2014年34期

4 郑敬民;尹广;赵文紧;刘志红;;过表达C3aR人足细胞的构建及鉴定[J];东南国防医药;2014年06期

5 甄珠;刘克芹;;可溶性黏附分子水平与系统性红斑狼疮中医辨证分型的关系[J];长春中医药大学学报;2015年02期

6 王爽;宋海燕;李婷婷;杨筱瑶;;SPARC在db/db小鼠肾脏组织中高表达[J];基础医学与临床;2013年09期

7 李玲;刘芳;付平;;补体C3a/C3aR与肾脏疾病[J];中国中西医结合肾病杂志;2013年12期

8 谢正平;朱斌;;获得性免疫缺陷综合征患者肺部机遇性感染的CT表现[J];医学研究生学报;2014年12期

9 夏迪;钱倩;刘志成;谭鸣鸣;丁媛;苏欣;孙文逵;施毅;;小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定[J];医学研究生学报;2015年04期

10 奚海燕;王颖;黄梅;李玲慧;范明;邵海枫;王卫萍;李晓军;;基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪在快速鉴定临床酵母菌中的应用[J];医学研究生学报;2015年04期

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 王艳;盐酸贝那普利对早期糖尿病大鼠足细胞Podocalyxin表达的影响[D];安徽医科大学;2012年

2 马钰;OX40/OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠免疫病理中的作用机制[D];苏州大学;2013年

3 徐金梅;以鱼类过敏性毒素C5a为分子佐剂的鱼类DNA疫苗开发[D];华东理工大学;2014年

4 刘晨风;高致病禽流感H5N1病毒感染小鼠病理损伤特征及补体介导的免疫病理损伤机制研究[D];安徽医科大学;2014年

5 王峰;三氯乙烯致敏小鼠免疫性肝损伤过程中补体活化产物对Th1/Th2细胞平衡调控研究[D];安徽医科大学;2014年

6 丁冉冉;三条补体通路在IgA肾病中的活化及致病作用探讨[D];青岛大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 姚茹冰;高佩芳;蔡辉;;树突状细胞与类风湿关节炎相关性研究进展[J];医学研究生学报;2009年09期

2 曹浩;范慧敏;刘中民;;Th17细胞分化和功能的研究进展[J];医学研究生学报;2009年11期

3 徐海;张启高;;系统性红斑狼疮合并心肌梗死6例病例报告[J];医学研究生学报;2011年10期

4 石尧;闫峰;聂闯;葛轶睿;黄振平;;狼疮性肾炎与干眼症的相关性分析[J];医学研究生学报;2012年03期

5 李芳秋;;重新认识特异性抗体对侵袭性真菌病的诊断价值[J];医学研究生学报;2012年04期

6 王高峰;孔庆涛;沈永年;王雪连;刘芳;王乐;冯姣;张敏;桑红;;模拟日光照射后真菌感染动物模型构建[J];医学研究生学报;2012年06期

7 郑敬民,刘志红,张鑫,黎磊石;db/db小鼠糖尿病肾病相关基因的分析和克隆[J];生物化学与生物物理进展;2003年03期

8 刘志红,郑敬民,吴义超,朱加明,黄燕飞,黎磊石;db/db糖尿病肾病小鼠肾脏基因表达谱及大黄酸对其的影响[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2002年03期

9 吴义超,刘志红,曾彩虹,苏健,陈朝红,黎磊石;糖尿病肾病患者肾小球基因表达谱及其与病情进展的关系[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2004年06期

10 陈姗;刘志红;王瑞石;孙骅;陈丹;陈朝红;黎磊石;;糖尿病肾病疾病进展相关基因的基因组学研究[J];中华肾脏病杂志;2006年09期

，

本文编号：874757