抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体的研制及其检测试剂的初步应用

发布时间：2017-09-20 07:22

  本文关键词：抗人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单克隆抗体的研制及其检测试剂的初步应用

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【摘要】：目的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)在国际上已成为临床诊断急性肾损伤(AKI)的主要生物标志物。该课题主要研制抗人NGAL单抗及探讨其国产化诊断试剂的初步应用。方法预测NGAL抗原表位并结合NGAL的晶体结构,设计合成抗原表位肽并与血蓝蛋白偶联,免疫小鼠制备抗NGAL单抗;人工合成NGAL基因构建原核表达载体p ET-Dsb A-NGAL,诱导表达后分离纯化重组NGAL蛋白,研制NGAL标准品;建立双单抗体夹心ELISA法,检测该方法的线性范围、检测限、灵敏度和精密度,同时检测20份健康对照组和20份AKI患者血清和尿液样品。结果针对NGAL两个表位(21-34aa;58-71aa)分别获得了4株和3株能够稳定分泌抗NGAL单抗的细胞株;ELISA法最低检出限为0.25 ng/ml,标准曲线在2.5~125.0 ng/ml范围内线性良好,批间变异CV值均小于10%;冻干NGAL标准品在4℃稳定达6个月;AKI组血清和尿液中NGAL含量分别为(589.5±75.5)和(89.4±12.4)ng/ml,而健康对照组血清和尿液中NGAL含量分别为(58.8±9.5)和(7.2±1.4)ng/ml;两组差异有统计学意义(P0.05)。结论该研究获得了抗人NGAL单抗及其基因工程NGAL标准品并建立了ELISA定量检测试剂,为实现NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化提供了良好的技术基础。
【作者单位】： 深圳市人民医院;
【关键词】： 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 单克隆抗体 ELISA 表位预测 急性肾损伤
【分类号】：R692;R446.6
【正文快照】： 急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)是由多种原因引起的肾功能在几小时至几天内突然下降而出现的临床综合征。重症患者并发AKI可导致急性肾功能衰竭,其死亡率超过26%[1]。传统诊断指标如血肌酐和尿素氮等因其敏感性和特异性均不高,容易导致AKI诊断滞后,从而贻误治疗时机。发

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本文编号：886665