肝再生增强因子在细胞线粒体氧化应激损伤中的作用研究

发布时间：2017-09-26 07:41

  本文关键词：肝再生增强因子在细胞线粒体氧化应激损伤中的作用研究

  更多相关文章： 肝再生增强因子 小干扰RNA 急性肾损伤 氧化应激 线粒体 真核表达质粒 肝再生增强因子 细胞增殖 细胞凋亡

【摘要】：第一部分下调肝再生增强因子对H202诱导的细胞线粒体氧化应激的影响目的：观察ALR是否参与了细胞氧化应激的病理过程,并探究下调ALR表达对H202诱导肾小管上皮细胞线粒体氧化应激损伤的影响。方法：采用H202诱导肾小管上皮细胞氧化应激损伤,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞ALR表达情况。设计特异性小干扰RNA(siRNA)下调HK-2细胞ALR表达,以siRNA/control对照组,实时荧光定量PCR、Western blot及免疫荧光验证ALR干扰效果,MTS检测细胞增殖能力。H202刺激12h后,流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位变化及细胞凋亡情况；Western blot检测凋亡蛋白Bcl-2/Bax表达水平及线粒体蛋白(Cyt C、Smac)释放；激光共聚焦检测Cyt C释放。结果：实时荧光定量PCR及Western blot检测显示,与siRNA/control对照组比较,H2O2刺激组细胞内源性23kD ALR mRNA及蛋白表达显著增加(P0.05)。MTS结果显示,下调23kD ALR表达对HK-2细胞增殖无明显影响(P0.05),但加重了H202诱导的细胞氧化应激损伤。与siRNA/control组相比,细胞ROS水平显著增加,膜电位降低细胞比例明显增加,促进了H202诱导的细胞凋亡蛋白表达及线粒体凋亡相关蛋白释放,增加了H2O2诱导的细胞凋亡水平,差异均有统计学意义(P0.05)。结论：23kD ALR参与了H202诱导的HK-2细胞氧化应激损伤。下调23kD ALR表达可加重H202诱导的HK-2细胞线粒体氧化应激损伤。第二部分23kD肝再生增强因子表达质粒构建及功能研究目的：探究过表达23kD肝再生增强因子对人正常肝细胞(L-02)增殖及凋亡的影响。方法：构建23kD ALR重组表达质粒pcDNA6/23kDALR。以MegaTran1.0转染试剂转染至L-02细胞,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞ALR mRNA及蛋白水平表达情况,MTS检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测H202诱导的细胞凋亡变化。结果：成功构建pcDNA6/23kDALR表达质粒。实时荧光定量PCR及Western blot检测显示,与空质粒对照组比较,L-02细胞过表达组23kD ALR表达显著增加(P0.01)；与空质粒对照组相比,pcDNA6/23kD ALR质粒转染48h及72h细胞增殖显著增强(P0.05),过表达23kD ALR可显著减少H2O2诱导的细胞凋亡(P0.05)。结论：23kD ALR过表达可促进L-02细胞增殖,减少H202诱导的细胞凋亡。
【关键词】：肝再生增强因子 小干扰RNA 急性肾损伤 氧化应激 线粒体 真核表达质粒 肝再生增强因子 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-16
• 第一部分：下调肝再生增强因子对H_2O_2诱导的细胞线粒体氧化应激损伤的影响16-42
• 前言16
• 第一节 氧化应激对人肾小管上皮细胞中肝再生增强因子表达水平的影响16-29
• 1 材料16-20
• 2 方法20-26
• 3 结果26-29
• 第二节 下调肝再生增强因子对H_2O_2诱导的肾小管上皮细胞线粒体氧化应激损伤的影响29-40
• 1 材料29
• 2 方法29-34
• 3 结果34-40
• 讨论40-41
• 小结41-42
• 第二部分：肝再生增强因子过表达质粒构建及功能研究42-54
• 前言42
• 1 材料42-44
• 2 方法44-49
• 3 结果49-52
• 4 讨论52-53
• 5 小结53-54
• 参考文献54-57
• 全文总结57-59
• 文献综述59-68
• 参考文献64-68
• 致谢68-69
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文69

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本文编号：922325