血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞Nlrp3活化与内质网应激的关系研究

发布时间：2017-09-26 23:28

  本文关键词：血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞Nlrp3活化与内质网应激的关系研究

  更多相关文章： Ang Ⅱ Nlrp3 炎性体 内质网应激

【摘要】：目的：肾小管间质炎症(tubulointerstitial inflammation, TⅡ)贯穿于整个肾脏纤维化过程,同时也是导致肾脏纤维化形成的关键因素。近年来研究证实,血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在肾小管间质炎症中发挥着重要作用,但其具体机制尚未阐明。本实验旨在探讨AngⅡ对肾小管上皮细胞炎性体Nlrp3活化的影响以及其与内质网应激的关系,以进一步阐明AngⅡ在肾小管间质炎症形成中的作用机制。方法：体外细胞培养方法培养人肾近端小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cell line,HK-2),并用不同浓度(OnM、1000nM、100nM、10nM)血管紧张素Ⅱ予以刺激,于不同时间点(0,6,12,24hr)收集细胞,通过real time RT-PCR、Western blotting检测炎性体相关标志物Nlrp3,ASC, caspase-1, IL-lbeta,IL-18及内质网应激相关标志物GRP78、p-eIF2α的基因和蛋白水平表达；激光共聚焦显微镜检测HK-2胞浆内的Nlrp3、ASC表达及其共定位；使用血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB),观察AngⅡ刺激后HK-2细胞中炎性体和内质网应激相关标志物的基因和蛋白表达情况；使用内质网应激抑制剂(4-PBA),观察AngⅡ刺激后HK-2细胞中炎性体和内质网应激相关标志物的基因和蛋白表达情况。结果：血管紧张素Ⅱ刺激HK-2细胞后,发现不同浓度(OnM、1000nM、100nM、10nM)和不同时间(0,6,12,24hr)刺激下,Nlrp3,ASC,caspase-1,IL-lbeta, IL-18,GRP78, p-eIF2a基因和蛋白表达水平均显著升高(p0.05),且在100nM AngⅡ刺激12h时达到高峰。而使用ARB干预后,Nlrp3,ASC,caspase-1,IL-lbeta, IL-18,GRP78,p-eIF2a基因和蛋白表达水平较AngⅡ干预组显著下降(p分别0.05),激光共聚焦显微镜结果显示,100nMAngII刺激12h时HK-2胞浆内的Nlrp3、ASC表达上调,并在胞膜周围共表达,而ARB干预后两者的表达水平减弱。最后使用4-PBA干预后,Nlrp3,ASC, caspase-1,IL-1beta,IL-18,GRP78,p-eIF2a基因和蛋白表达水平较AngⅡ干预组显著下降(p分别0.05)。结论：本研究表明, AngⅡ能够通过引起内质网应激而诱导肾小管上皮细胞炎性体Nlrp3活化,从而介导肾小管间质炎症的发生。
【关键词】：Ang Ⅱ Nlrp3 炎性体 内质网应激
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要缩略语注释表(Abbreviations)9-13
• 前言13-15
• 文献综述15-24
• 实验材料与方法24-40
• 1 实验材料24-26
• 2 实验方法26-39
• 3 统计学方法39-40
• 研究结果40-49
• 讨论49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-58
• 致谢58-59
• 作者简介59

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