黄葵素对DN大鼠模型及肾系膜细胞NF-κB信号通路干预作用的研究

发布时间：2017-09-29 18:22

  本文关键词：黄葵素对DN大鼠模型及肾系膜细胞NF-κB信号通路干预作用的研究

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【摘要】：目的：1.从分子、细胞及动物模型水平多层次探讨糖尿病肾病背景下肾脏局部NF-κB通路激活,及其对糖尿病肾病的影响。2.评估黄葵素降低蛋白尿的作用,明确其对NF-κB通路与下游炎症因子的影响。材料和方法：1.动物实验：雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖肾对照组、阳性药对照组(厄贝沙坦12mg/Kg)以及不同剂量黄葵素治疗组(75mg/Kg/d、135mg/Kg/d、 300mg/Kg/d),正常对照组10只,其余各组40只。选择高糖高脂饮食结合低剂量链脲菌素(STZ)诱导SD大鼠制备DM模型,该模型早期表现为高血糖,后期出现蛋白尿等DN表现,体现了DM进行性肾损害的特点。DN成模后,所有药物均灌胃给药,正常对照组、糖肾对照组每日接受等量生理盐水灌胃。连续给药8周后收集标本,ELISA法检测大鼠血清及肾组织TNF-a、IL-1β和IL-6表达水平；免疫组化检测肾组织NF-κB的表达水平；Western-blot检测肾组织细胞核的NF-κB p65蛋白表达水平；Q-PCR检测肾组织NF-κB p65、 TNF-α、IL-1β和IL-6mRNA的表达。2.体外实验：将大鼠肾小球系膜细胞(GMC)分为空白血清组、TNF-a组、药物血清加TNF-a组。体外培养24小时,加入血清36h后,加入浓度为10ng/ml的TNF-a诱导损伤12h,双荧光素酶报告基因检测大鼠肾系膜细胞中NF-κB p65转录水平；ELISA法验证上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平。结果：1.药物干预各组均能延缓大鼠体重下降,与糖肾组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。黄葵素高剂量组及厄贝沙坦组可显著改善DN大鼠的血糖,降低尿ACR,与糖肾组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。2ELISA结果示,与糖肾组相比,黄葵素中剂量组可显著降低DN大鼠血清中TNF-a水平,肾组织中IL-6的分泌水平(P0.05)；黄葵素高剂量组可抑制DN大鼠血清和肾组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌水平,差异具有统计学意义(P0.05)；厄贝沙坦组可显著降低血清及肾组织中IL-6、IL-1β的分泌水平,血清中TNF-a的水平也得到抑制,差异均具有统计学意义(P0.05)。3Q-PCR结果示,与糖肾模型组比较,药物干预各组肾组织中TNF-a、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平均有所下降,黄葵素高剂量组、厄贝沙坦组差异具有统计学意义(P0.05)。4.免疫组化结果示,药物干预各组肾组织细胞核中NF-κB p65表达水平均有下降,其中黄葵素高剂量组及厄贝沙坦组与糖肾组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。5WesternBlot结果示药物干预后各组肾组织细胞核中NF-κB p65蛋白的表达水平均有下降,但总mRNA表达水平与与糖肾组比较,无明显差异(P0.05)。6.大鼠肾系膜细胞胞内luciferase assay实验结果显示,TNF-a能够诱导胞内NF-κB信号活性上调,而经过含有黄葵素血清处理的细胞内,此上调趋势受到显著抑制,经含药血清处理的GMC细胞上清液中,TNF-a、IL-1β、IL-6的分泌均显著性下调,与TNF-a组相比,差异有统计学意义(p0.05)。结论：1.糖尿病背景下肾脏局部NF-κB通路激活,诱发炎症反应释放炎症因了,导致蛋白尿的发生及发展。2.黄葵素可显著缓解糖尿病肾病尿蛋白,其肾保护机制可能与抑制NF-κB p65炎性反应信号通路,降低促炎因了释放有关。
【关键词】：黄葵素 糖尿病肾病 NF-κB 炎症
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R692.9
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 第一部分 理论研究12-25
• 1. 现代医学DN研究进展12-17
• 1.1 发病机制12-16
• 1.1.1 氧化应激12-13
• 1.1.2 多元醇通路13-14
• 1.1.3 血流动力学14-15
• 1.1.4 炎症状态及经典炎症因子15
• 1.1.5 NF-κB信号通路与DN15-16
• 1.2 现代医学治疗进展简述16-17
• 2. 中医浅析糖尿病肾病17-25
• 2.1 病名溯源17-18
• 2.2 病因病机18-19
• 2.3 糖尿病肾病中医治疗进展19-25
• 2.3.1 辩证论治19-22
• 2.3.2 单味中药及中药提取物治疗糖尿病肾病进展22-25
• 第二部分 实验部分25-42
• 1. 实验材料25-27
• 1.1 实验动物25
• 1.2 实验药物25
• 1.3 主要实验试剂及耗材25-26
• 1.4 实验仪器26
• 1.5 主要实验溶液26-27
• 2. 实验方法27-31
• 2.1 体内实验27-28
• 2.1.1 DN大鼠模型的建立27
• 2.1.2 动物给药27
• 2.1.3 大鼠尿液、血消和肾脏标本采集27-28
• 2.2 体外实验部分28-30
• 2.3 数据统计分析30-31
• 3. 结果31-39
• 3.1 黄葵素能缓解DN大鼠的一般症状31-33
• 3.2 黄葵素能抑制大鼠血清及肾组织炎症因子的分泌33-35
• 3.3 黄葵素抑制大鼠肾组织中NF-κB信号通路35-38
• 3.4 黄葵素能抑制GMC中NF-κB信号通路活性38-39
• 4. 讨论39-42
• 1、本次研究的主要成果41
• 2、本次研究存在的不足和展望41-42
• 参考文献42-46
• 附录46-48
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果48-49
• 致谢49

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