沉默Notch信号通路对膀胱癌EMT影响的体内研究

发布时间：2017-09-29 21:20

  本文关键词：沉默Notch信号通路对膀胱癌EMT影响的体内研究

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【摘要】：目的:通过体内实验探讨沉默Notch受体对膀胱癌对上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响和分子机制。方法:构建膀胱肿瘤5637细胞裸鼠移植模型18只,随机分成3组(n=6):分别为加药组(γ分泌酶抑制剂处理组)、转染组(沉默Notch-1受体组)和对照组。每7天皮外测量瘤体大小,5周后处死,取出瘤体,测量瘤体大小及质量,病理切片检测瘤体性质,免疫组化检测瘤体内EMT标记物蛋白的表达情况,通过RT-PCR及为westen blot技术检测各组瘤体组织内E-cadherin、N-cadherin、vimentin的m RNA及蛋白表达变化。结果:加药组、及转染组瘤体生长速度均低于对照组(P0.05),加药组瘤体生长速度低于转染组(P0.05),5周后,加药组瘤体大小、质量显著低于对照组(P0.05),转染组瘤体大小、质量均低于对照组(P0.05),加药组瘤体大小、质量均低于转染组(P0.05),经病理切片证实为恶性肿瘤组织,镜下见瘤细胞大小不等,细胞核浓染,胞浆丰富,异型性明显,细胞密集。通过免疫组化检测瘤体内EMT标记物蛋白的表达情况示:移植肿瘤组织中,转染组E-cadherin、N-cadherin蛋白表达上调,vimentin蛋白表达下调;加药组E-cadherin蛋白表达上调,而N-cadherin、vimentin蛋白表达下调(图15)。通过RT-PCR及western blot技术检测各组瘤体组织内E-cadherin、N-cadherin、vimentin的m RNA及蛋白表达变化,结果显示:转染组E-cadherin、N-cadherin m RNA和蛋白表达显著性上调(P0.05),vimentin m RNA和蛋白显著性下调(P0.05);加药组E-cadherin m RNA和蛋白表达显著性上调(P0.05),而N-cadherin、vimentin m RNA和蛋白显著性下调(P0.05)。结论:在体内通过沉默Notch信号通路,能有效抑制膀胱癌EMT进程,并有效的抑制瘤体生长。
【关键词】：膀胱癌 Notch EMT 裸鼠
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料与方法12-21
• 2.1 实验材料12-14
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 细胞株来源12
• 2.1.3 主要试剂12-13
• 2.1.4 主要仪器与设备13
• 2.1.5 主要试剂的配制13-14
• 2.2 实验方法14-20
• 2.2.1 细胞培养14
• 2.2.2 细胞复苏和换液14-15
• 2.2.3 细胞传代15
• 2.2.4 细胞冻存15
• 2.2.5 调整细胞浓度15-16
• 2.2.6 实验动物饲养16
• 2.2.7 实验裸鼠移植瘤模型的构建16
• 2.2.8 裸鼠的分组及处理16
• 2.2.9 裸鼠生长状态及移植瘤的观察16-17
• 2.2.10 瘤体组织HE染色法17
• 2.2.11 瘤体组织免疫组化17-18
• 2.2.12 瘤体组织qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的m RNA表达变化18-19
• 2.2.13 瘤体组织western blot检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的蛋白表达19-20
• 2.3 统计学处理20-21
• 第3章 结果21-26
• 3.1 裸鼠模型成瘤率及各组裸鼠体内肿瘤生长情况观察21
• 3.2 各瘤体之间的比较21-22
• 3.3 HE染色22-23
• 3.4 免疫组化23-24
• 3.5 Western bloting检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的m RNA表达变化24-25
• 3.6 qRT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的m RNA表达变化25-26
• 第4章 讨论26-29
• 第5章 结论和展望29-30
• 5.1 结论29
• 5.2 展望29-30
• 致谢30-31
• 参考文献31-34
• 综述 膀胱癌相关信号通路研究进展34-38
• 参考文献37-38

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本文编号：944277