P-糖蛋白在不同膀胱癌细胞株间的选择性转移

发布时间：2017-10-04 22:00

  本文关键词：P-糖蛋白在不同膀胱癌细胞株间的选择性转移

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【摘要】：目的探讨功能性P-糖蛋白在膀胱癌不同细胞株间是否存在选择性转移及其机制。方法用Transwell将膀胱癌耐药株细胞BIU-87/ADM分别与敏感膀胱癌细胞株T24和EJ进行共培养,共聚焦显微镜观察共培养Transwell下室的T24和EJ细胞(即获得性耐药细胞Aq MDR)P-糖蛋白的转移,利用Western Blot检测BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞P-gp的表达量,利用RT-PCR分析这些细胞MDR1 m RNA的表达水平。采用流式细胞术测BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞内罗丹明-123荧光强度。利用RT-PCR分别对BIU-87/ADM、BIU-87、EJ、T24细胞中几种介导肿瘤细胞间恶性特质转移的细胞膜蛋白或受体(CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1)的m RNA表达情况进行检测。结果共聚焦结果显示这些细胞核均呈蓝色荧光,胞浆和胞膜呈不同程度的绿色荧光,BIU-87/ADM呈强绿色荧光,T24/aq MDR呈中等强度绿色荧光,而T24、EJ/aq MDR及EJ细胞均呈现弱绿色荧光。Western Blot检测结果显示,BIU-87/ADM细胞中P-gp的表达水平最高,T24/aq MDR细胞中P-gp的表达弱于BIU-87/ADM细胞(p0.05),却明显强于T24细胞(p0.05),而EJ/aq MDR和EJ细胞中P-gp表达水平均较低。RT-PCR结果显示,只有BIU-87/ADM细胞中MDR1 m RNA表水平较高,而其余四种细胞表达水平很低且彼此间差异无统计学意义(p0.05)。罗丹明123试验显示:BIU-87/ADM、T24/aq MDR、T24、EJ/aq MDR及EJ细胞内荧光强度依次增高,其中T24、EJ/aq MDR及EJ细胞中荧光强度均较强且彼此间差异亦无统计学意义(p0.05)。RT-PCR检测CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1在七种细胞中表达水平均较高,但彼此间差异也无统计学意义(p0.05)。结论P-gp能够从耐药的膀胱癌细胞株BIU-87/ADM转移到敏感的膀胱癌细胞株T24中,且这种获得性P-gp具有药物外排功能。而P-gp不能或者很少量从耐药的膀胱癌细胞株BIU-87/ADM转移到敏感的膀胱癌细胞EJ中。在共培养前后P-gp转移的过程中不伴有多药耐药基因MDR1的转移。这一现象说明P-gp在膀胱癌不同细胞株间转移具有选择性,在以微粒(MPs)介导的膀胱癌细胞株间P-gp转移的机制中,CD44分子、Ezrin蛋白、整合素b1在各种细胞中表达均无明差异,即无充分证据支持这些粘附分子参与了P-gp在膀胱癌细胞间的转移,这也为进一步研究P-gp介导的膀胱癌多药耐药的机制提供了新的思路及研究方向。
【关键词】：膀胱癌细胞 P-糖蛋白 mdr1基因 多药耐药 膜微粒
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

• 英文缩写一览表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 前言7-10
• 材料与方法10-22
• 1 实验材料10-13
• 2 实验方法13-22
• 结果22-31
• 1 激光共聚焦显微镜观察P-gp在不同AqMDR 细胞的转移22-23
• 2 Western Blot 分析各种细胞P-gp表达水平23-24
• 3 RT-PCR 检测各组细胞 MDR1 的 m RNA 表达24-25
• 4 罗丹明-123 外排实验25-27
• 5 RT-PCR检测编码CD44 、Ezrin、整合素β1等蛋白的基因的mRNA在各种细胞中的表达水平27-31
• 讨论31-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 综述39-46
• 参考文献44-46
• 致谢46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 朱宝英;黄静;王永林;方翼;;P-糖蛋白及肿瘤多药耐药的逆转[J];中国药房;2011年06期

2 闻镍;张双庆;朱凌;于敏;李佐刚;;P-糖蛋白最新研究进展[J];中国药事;2011年07期

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本文编号：973064