S100A8蛋白质与泌尿系草酸钙结石的相关性研究

发布时间：2017-10-05 01:09

  本文关键词：S100A8蛋白质与泌尿系草酸钙结石的相关性研究

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【摘要】：目的:通过观察草酸钙结石病人尿液中S100A8蛋白质与健康人尿液中S100A8蛋白质差异性表达程度,以及在体外模型中对比不同浓度的S100A8蛋白质的变化,探讨S100A8蛋白质在草酸钙结石形成过程中的功能。在体外构建草酸钙结晶模型,采用种晶技术检测不同浓度的S100A8蛋白质对体外草酸钙(Ca Ox)结石晶体生长抑制指数,检测其结晶诱导时间,成核和聚集速率。在体外观察不同浓度的S100A8蛋白质对草酸钙晶型形成的影响。方法:(1)收集从2014年9月至2015年9月期间我院通过手术取石术后临床上尿路结石标本并进行结石成分分析得到草酸钙成分的标本共50例,收集相应草酸钙结石病人入院后手术前晨尿标本,共50例,及健康人(未患结石疾病)尿液标本50例。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测草酸钙结石标本、结石病人尿液标本和健康人尿液标本中的S100A8蛋白浓度。(2)采用种晶技术构建体外结石晶体模型,设置多组不同浓度梯度的S100A8蛋白,将其加入上述各模型中,使S100A8蛋白质对结石模型充分混合进行反应与作用,使用原子吸收分光光度计进行检测,计算并统计草酸钙晶体生长抑制指数。(3)使用原子吸收分光光度计检测加入不同浓度S100A8蛋白质的草酸钙溶液的吸光度值,并绘制成核聚集曲线,计算草酸钙晶体生长诱导时间,成核速率和聚集速率。(4)在体外构建的草酸钙模型中,加入不同浓度的S100A8蛋白质,使用电子显微镜进行观察,了解所形成的草酸钙结石晶体形貌、尺寸大小以及不同晶体的所占的比例。(5)统计学数据用(?)±s表示,使用SPSS19.0统计学软件进行处理,进行统计学分析,两组数据比较,采用t检验进行统计学分析,多组数据间比较,采用单因素方差分析。结果:(1)草酸钙结石标本中含有S100A8蛋白质,且其浓度值的范围为:6.231±0.251ng/m L。(2)草酸钙结石病人尿液中及健康人(未患结石疾病)尿液标本中均含有S100A8蛋白质,但是草酸钙结石病人尿液标本中的S100A8蛋白质浓度范围为:56.258±0.229ng/m L,而健康人(未患结石疾病)尿液标本中的S100A8蛋白质浓度范围为:13.589±0.236ng/m L,实验组和正常组对比,其差异具有统计学意义(P0.05)。可以看出草酸钙结石病人的尿液标本中的S100A8蛋白质浓度明显高于健康人尿液标本。(3)体外实验表明不同浓度的S100A8蛋白质体外对草酸钙结晶生长的抑制作用:随蛋白质浓度增加,它对草酸钙结石晶体生长的抑制指数逐渐降低,而且,组间差异性具有统计学意义(P0.05)。(4)通过分光光度计将各组加有不同浓度的S100A8蛋白质的草酸钙溶液进行检测和计算晶体最大诱导时间T_(max)、成核速率S_N和聚集速率S_A参数值比较发现,在添加不同浓度S100A8蛋白质的情况下,T_(max)减少,S_N和S_A都有所上升,且随着蛋白质浓度的升高,T_(max)逐渐减小,而S_N和S_A逐渐增大。(5)在S100A8蛋白质干预的草酸钙结石模型中,均有截面为六边形的晶体与双四棱锥型的晶体产生,但是不同晶型的比例有区别。随着S100A8蛋白质浓度的增加,截面为六边形的晶体的比例和尺寸大小逐渐增大,双四棱锥型的晶体比例和尺寸大小逐渐减小。结论:(1)泌尿系草酸钙结石中含有一定量的S100A8蛋白质。(2)草酸钙结石病人尿液中及健康人(未患结石疾病)尿液标本中均含有S100A8蛋白质,且草酸钙结石病人尿液S100A8蛋白质浓度高于健康人,其差异性具有统计学意义。(3)S100A8蛋白质在随着浓度的升高,在体外的草酸钙晶体能够有效地促进尿草酸钙晶体成核和聚集。(4)低浓度S100A8蛋白质干预所形成的草酸钙晶体类型为COD,不易粘附和沉积,更有利于人体排出,而高浓度的S100A8蛋白质干预所形成的草酸钙晶体类型为COM,不易随尿液排出。(5)草酸钙结石患者结石标本中的S100A8蛋白质的过度表达及其尿液中S100A8浓度的升高可能是草酸钙结石(Ca Ox)形成和生长的非常重要的影响因素。(6)体外种晶技术能有效地构建草酸钙结石模型,并能检验蛋白质大分子对结石形成过程中的功能研究。
【关键词】：草酸钙结石 尿液蛋白 酶联免疫吸附测定 S100A8
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R691.4
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 中英文缩略词表11-12
• 第1章 引言12-18
• 1.1 大分子蛋白质在结石形成和生长中有重要意义12-13
• 1.2 S100A8蛋白质可能参与草酸钙结石形成过程13-14
• 1.3 S100A8可能通过炎症反应调控肾草酸钙结石形成14-16
• 1.4 草酸钙结石的体外研究16-18
• 第2章 实验材料与方法18-29
• 2.1 实验材料18-20
• 2.1.1 结石标本收集18
• 2.1.2 研究对象筛选18
• 2.1.3 尿液标本收集18-19
• 2.1.4 研究对象筛选19-20
• 2.2 主要仪器和试剂20-23
• 2.2.1 主要仪器20
• 2.2.2 主要试剂20-21
• 2.2.3 酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂的配制21-22
• 2.2.4 不同浓度S100A8蛋白质的配制22
• 2.2.5 草酸钙籽晶悬液配制22
• 2.2.6 草酸钙亚稳过饱和液的配制22
• 2.2.7 晶体生长实验溶液的配制22-23
• 2.3 研究方法23-28
• 2.3.1 结石成分分析23-24
• 2.3.2 提取结石蛋白24
• 2.3.3 丙酮法提取尿液蛋白24-25
• 2.3.4 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测泌尿系结石标本中S100A8蛋白质的表达25
• 2.3.5 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测草酸钙结石病人与健康人尿液标本中S100A8蛋白质的表达25-26
• 2.3.6 S100A8蛋白质对草酸钙结石晶体生长抑制指数的影响26-27
• 2.3.7 S100A8蛋白质对草酸钙结晶的动力学影响研究27-28
• 2.3.8 S100A8蛋白质对草酸钙结石晶体形貌及大小等方面的影响28
• 2.4 统计学数据分析28-29
• 第3章 结果与分析29-41
• 3.1 结石成分分析结果29-31
• 3.2 ELISA法检测草酸钙结石标本中S100A8蛋白浓度31-32
• 3.3 ELISA法检测草酸钙结石病人及健康人尿液标本中S100A8蛋白质浓度32-34
• 3.4 不同浓度S100A8蛋白质对草酸钙结石的生长抑制指数34-36
• 3.5 不同浓度的S100A8蛋白质对草酸钙结晶的动力学影响36-38
• 3.6 不同浓度的S100A8蛋白质对草酸钙结石中的晶体形成的影响38-41
• 第4章 讨论41-47
• 4.1 蛋白质大分子与结石基质41-42
• 4.2 S100A8蛋白质与体外草酸钙结石形成42-44
• 4.3 S100A8蛋白质在体内参与酸钙结石形成的可能机制44-45
• 4.4 S100A8蛋白质可否作为泌尿系结石形成的标志物45-47
• 第5章 结论47-48
• 致谢48-49
• 参考文献49-55
• 综述55-60
• 参考文献58-60

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本文编号：973890