HER2/PI3K/AKT通路在恶性脑膜瘤细胞生长、迁移中的作用

发布时间：2021-01-09 01:44

　　目的:观察HER2基因是否通过PI3K/AKT信号通路影响恶性脑膜瘤细胞的增殖、迁移。方法:1、经病毒感染分别将沉默和过表达HER2基因质粒转染至恶性脑膜瘤IOMM-Lee细胞株中。实验分为五组:第一组:空白组（Blank）;第二组:沉默阴性对照组（NC-sh）;第三组:沉默HER2基因组（HER2-sh）;第四组:过表达阴性对照组（NC-ox）;第五组:过表达HER2基因组（HER2-ox）。应用q-PCR和Werstern blot检测各组细胞HER2 m RNA和蛋白表达水平。2、CCK8法检测各组细胞的生长增殖情况;Transwell小室迁移法检测各组细胞迁移能力;流式细胞术检测各组细胞周期变化。3、Western blot检测各组细胞HER2、PI3K、AKT、P-AKT、m TOR、P-m TOR、S6、P-S6、NF-κB、Cyclin D1、VEGF蛋白的表达。4、用PI3K抑制剂LY294002、m TOR抑制剂KU0063794不同浓度（终浓度为20、60、100、5、10、20μmol/L）的培养液24、48、72h后,CCK8、Transwell小室迁移实验检测... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

慢病毒转染恶性脑膜瘤细胞MOI值的确定及转染率的测定

图 2-2: q-PCR 检测 HER2 mRNA 的表达水平。转染后 72h，沉默组细 H平(*P<0.05)；过表组细胞 HER2 mRNA 表达水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 检测各组细胞 HER2 蛋白的表达情况6 孔板接种各组细胞（细胞数 1.5×105个），转染后 96 小时白，Western blot 结果示：沉默 HER2-sh 组与 NC-sh 组比较，HER2 蛋白都下降 65.76%，差异有统计学意义（P<0.05）；HE比较，HER2-ox 组的 HER2 蛋白表达水平升高，约为 NC-ox 组有统计学意义（P<0.01）（图 2-3）。沉默和过表达 HER2 恶性白水平达到分组要求，能继续进行后期实验。

图 2-2: q-PCR 检测 HER2 mRNA 的表达水平。转染后 72h，沉默组细 HER2 mRNA 表达平(*P<0.05)；过表组细胞 HER2 mRNA 表达水平(*P<0.05)。2.2.5 Western blot 检测各组细胞 HER2 蛋白的表达情况6 孔板接种各组细胞（细胞数 1.5×105个），转染后 96 小时提取各组细胞白，Western blot 结果示：沉默 HER2-sh 组与 NC-sh 组比较，HER2-sh 的细HER2 蛋白都下降 65.76%，差异有统计学意义（P<0.05）；HER-ox 与 NC-ox比较，HER2-ox 组的 HER2 蛋白表达水平升高，约为 NC-ox 组的 5.95 倍，差有统计学意义（P<0.01）（图 2-3）。沉默和过表达 HER2 恶性脑膜瘤细胞在白水平达到分组要求，能继续进行后期实验。


本文编号：2965724