丝素/胶原蛋白支架联合雪旺细胞及脂肪干细胞共培养修复大鼠坐骨神经缺损的研究

发布时间：2021-01-10 07:39

　　目的:组织工程化神经作为自体神经移植的有效替代物,被广泛用于桥接神经缺损及引导神经生长的研究。组织工程化神经和自体神经移植的最大区别在于它们所处的再生微环境不同。如果提供一个理想的再生微环境,组织工程化神经对周围神经的缺损修复还很切实可行的。本研究为了最大程度上地模拟机体再生微环境,我们选择共培养雪旺细胞和脂肪干细胞作为种子细胞,并进一步地将它们引入丝素/胶原蛋白神经支架中,以此来构建组织工程化神经。然后用于修复大鼠坐骨神经10mm缺损,术后12周行电生理学及形态分析学等一系列检查评估神经再生情况。方法:1.分离培养大鼠雪旺细胞（SCs）,并行光镜下形态观察及雪旺细胞标记物S-100免疫荧光染色鉴定;分离培养大鼠脂肪干细胞（ADSCs）,并取其第3代行流式细胞仪分析,观察其表型CD29、CD34、CD45、CD73、CD90和CD105表达情况;取第3代雪旺细胞与脂肪干细胞按2∶1比例进行共培养,每天倒置相差显微镜下观察细胞形态变化。培养14天后,采用免疫荧光染色检测MAP2、NeuN和GFAP神经特异标志物表达情况。2.丝素/胶原蛋白神经支架的制备:以桑蚕丝和牛腱为原料制备丝素蛋白和... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

雪旺细胞形态学及其免疫荧光观察（A图第3代雪旺细胞倒置相差显微镜下形态观察100×，B图S-100标记物免疫荧光染色400×）

图 2 脂肪干细胞形态及其细胞流式检测（A 图第 3 代脂肪干细胞倒置相差显微镜下形态观察 100×，B 图流式细胞仪检测脂肪干细胞表型特征）.3 SCs-ADSCs 共培养观察及鉴定SCs-ADSCs 共培养 24h，原来呈梭形的 ADSCs 以胞核为中心收缩，胞体呈锥、三角形或不规则形，体积变小并伸出许多短而细的指状突起。3d 后多数细的胞体呈球形改变，胞体折光性增强，胞体伸出多个长而粗的突起。7d 时多细胞显示出神经细胞的形态学特征（图 3）。共培养 14d 细胞免疫荧光染色显，细胞不同程度表达 MAP2（25.20±3.03%）、NeuN（22.60±3.20%）以及 GFAP14.80±3.70%）等神经细胞特异标记物（图 4）。

共培养组7d时细胞形态100×

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2968332