紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究

发布时间：2017-04-28 14:03

  本文关键词：紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察紫杉醇(PTX)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的防治作用并探讨其作用机制。方法:将50只Wistar雌性大鼠随机分为5组:正常对照组、EAE对照组及PTX小剂量、中剂量、大剂量组,每组10只。用新鲜豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)与含卡介苗(BCG)的完全福氏佐剂(CFA)作为免疫抗原注入EAE对照组及PTX各剂量组大鼠双足侧足垫(2ml/kg)进行EAE造模,正常对照组给予相同剂量的完全福氏佐剂。自造模当日起连续10天,PTX小、中、大剂量组分别给予PTX1mg、2mg、4mg/(kg.d)腹腔注射进行干预。观测各组大鼠临床发病情况、潜伏期、进展期及发病高峰期神经功能障碍评分。于EAE大鼠发病高峰期(大鼠神经功能障碍评分连续三天无增加或大鼠处于濒死状态、对外界刺激无反应或死亡)终止实验,已经注入免疫抗原进行EAE造模处理而未发病大鼠及正常对照组大鼠分别均于观察1个月后处死。留取大鼠脑脊髓组织、眶静脉血和脾脏组织。部分大鼠脑脊髓组织作苏木素-伊红(HE)染色后行光镜观察并根据Okuda等标准进行评分,部分经相应处理后采用流式细胞仪测定脑组织CD28、CTLA-4含量(又称CD152);通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-γ和IL-4水平;并采用放射免疫法测定血清TGF-β含量;用流式细胞仪的方法检测大鼠脾组织Thl细胞、Th2细胞的比例;采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定脾组织上清液B淋巴细胞刺激因子(BAFF)含量。使用spss17.0软件对数据进行统计学分析。结果:(1)临床情况:①正常对照组大鼠未发病;EAE对照组大鼠全部发病;PTX小、中、大剂量组分别有7、5、4只大鼠发病。发病时大鼠表现为不同程度尾巴张力降低、共济失调、四肢瘫痪、濒死状态甚至死亡,但PTX各剂量组大鼠的临床症状较EAE对照组轻,且剂量越大,症状越轻。②与EAE对照组相比,PTX各剂量组发病潜伏期均延长(P0.05),剂量越大潜伏期延长越明显,大与小剂量组、中与小剂量组潜伏期差异有统计学意义(P0.05),但大与中剂量组潜伏期差异无统计学意义(P0.05)。③与EAE对照组相比,PTX各剂量组疾病进展期均缩短,且随PTX剂量增加而缩短越明显,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。④与EAE对照组相比,PTX各剂量组神经功能障碍评分均降低,且随PTX剂量增加而降低越明显,各组间差异具有统计学意义(P0.05)。(2)HE染色病理学观察:正常对照组大鼠脑组织内未见炎性细胞浸润。EAE对照组及PTX各剂量组脑组织小血管周围均可见不同程度炎性细胞浸润,典型者大量淋巴细胞及单核细胞聚集于血管周围呈袖套样改变。按Okuda等标准进行评分,与EAE对照组相比,PTX各剂量组评分均有下降(P0.05),且随PTX剂量增加而脑组织病理学评分依次降低,各剂量组间差异具有统计学意义(P0.05)。(3)EAE对照组及PTX各剂量组脑组织CD28、CTLA-4含量变化:①EAE对照组及PTX各剂量组脑组织CD28含量较正常对照组高,差异具有统计学意义(P0.01);PTX各剂量组脑组织CD28含量皆较EAE对照组降低,差异均具有统计学意义(P0.01);脑组织CD28含量随PTX剂量增加而明显降低,各组间差异有统计学意义(P0.01)。②EAE对照组及PTX各剂量组脑组织CTLA-4含量较正常对照组低,其中EAE对照组、PTX中、小剂量组与正常对照组差异均具有统计学意义(P0.01);PTX各剂量组脑组织CTLA-4含量均较EAE对照组升高,差异均具有统计学意义(P0.01);脑组织CTLA-4含量随PTX剂量增加而明显增加,PTX大、小剂量组差异有统计学意义(P0.01),PTX大与中剂量组、中与小剂量组差异无统计学意义(P0.05)。(4)EAE对照组及PTX各剂量组PBMC分泌IFN-γ和IL-4水平及其比值变化:①EAE对照组及PTX各剂量组大鼠发病高峰期PBMC分泌INF-γ能力较正常对照组增强(P0.01),PTX大剂量组分泌INF-γ能力较EAE对照组明显降低(P0.01),但PTX各剂量组间分泌INF-γ能力差异无统计学意义(P0.05)。②EAE对照组及PTX各剂量组大鼠发病高峰期PBMC分泌IL-4能力较正常对照组降低(P0.01),PTX各剂量组PBMC分泌IL-4能力较EAE对照组增强(P0.01),且随PTX剂量的增加而分泌IL-4能力逐渐增强,其中大剂量组分泌IL-4的能力与中、小剂量组间差异有统计学意义(P0.01或P0.05),但中、小剂量间差异无统计学意义(P0.05)。③EAE对照组及PTX各剂量组大鼠发病高峰期INF-γ/IL-4比值较正常对照组升高(P0.01),PTX各剂量组INF-γ/IL-4比值较EAE对照组降低(P0.01),且随PTX剂量增加,其比值逐渐减小,PTX各剂量组间INF-γ/IL-4比值差异均有统计学意义(P0.01)。(5)EAE对照组及PTX各剂量组血清TGF-β含量变化:与正常对照组相比,EAE对照组及PTX各剂量组血清TGF-β含量均减少(P0.05)。与EAE对照组比较,PTX各剂量组TGF-β含量均增加(P0.05),且随PTX剂量的增加,血清TGF-β含量逐渐增大,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。(6)脾组织Th1细胞、Th2细胞含量、Th1/Th2比值及脾组织上清液BAFF含量变化:①与正常对照组相比,EAE对照组及PTX各剂量组脾组织Th1细胞含量增加、Th2细胞含量降低,Th1/Th2比值增加,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05);与EAE对照组比较,PTX各剂量组脾组织Th1细胞含量降低、Th2细胞含量增加,Th1/Th2比值降低,其中大剂量组脾组织Th1细胞、Th2细胞含量与EAE对照组差异具有统计学意义(P0.05或P0.01),PTX各剂量组Th1/Th2比值较EAE对照组降低,差异具有统计学意义(P0.01);随PTX剂量的增加,脾组织Th1细胞含量依次减少、Th2细胞含量依次增加、Th1/Th2比值依次减少,其中大与小剂量组Th1细胞含量差异有统计学意义(P0.05),大、中剂量组Th2细胞含量皆与小剂量组差异具有统计学意义(P0.01),PTX各剂量组脾组织Th1/Th2比值差异均具有统计学意义(P0.01或P0.05)。②与正常对照组相比,EAE对照组及PTX各剂量组脾组织上清液BAFF含量均增加(P0.01);与EAE对照组比较,PTX各剂量组脾组织上清液BAFF含量均减少(P0.01或P0.05);随PTX剂量的增加,BAFF含量依次减少,各组间差异均有统计学意义(P0.01)。(7)相关性分析:①EAE对照组及PTX各剂量组发病潜伏期与大鼠脑组织CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾组织Th2细胞含量呈正相关(P0.01),与脑组织CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾组织Th1细胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈负相关(P0.01或P0.05)。②EAE对照组及PTX各剂量组发病进展期与大鼠脑组织CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾组织Th1细胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈正相关(P0.01或P0.05),与脑组织CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾组织Th2细胞含量呈负相关(P0.01)。③EAE对照组及PTX各剂量组发病高峰期大鼠神经功能障碍评分与大鼠脑组织CD28、外周血PBMC分泌IFN-γ/IL-4比值和脾组织Th1细胞、BAFF含量、Th1/Th2比值呈正相关(P0.01或P0.05),与脑组织CTLA-4含量、血清TGF-β含量、脾组织Th2细胞含量呈负相关(P0.01)。结论:1.EAE大鼠Th1/Th2比值、IFN-γ/IL-4比值升高、CD28含量增加、CTLA-4含量降低、BAFF水平增加,其变化与EAE大鼠临床病情、脑脊髓组织病理变化密切相关,提示Th1/Th2平衡漂移及其代表因子IFN-γ/IL-4比值异常、CD28/CTLA-4含量异常、BAFF水平异常在EAE发病中发挥着重要作用。2.PTX可改善EAE大鼠的临床症状,延长发病潜伏期,缩短疾病进展期,降低疾病高峰期神经功能障碍评分,改善EAE大鼠脑组织病理学改变,且PTX剂量越大,影响越明显,提示PTX对EAE大鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖关系。3.PTX对EAE大鼠发病防治作用的机制可能通过纠正Th1/Th2漂移、降低IFN-γ/IL-4比值、减少CD28含量、增加CTLA-4含量、抑制BAFF产生而发挥的。
【关键词】：紫杉醇 实验性变态反应性脑脊髓炎 T淋巴细胞 细胞因子 B淋巴细胞刺激因子
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 中文摘要3-8
• 英文摘要8-15
• 前言15-18
• 材料与方法18-26
• 结果26-43
• 讨论43-56
• 结论56-57
• 参考文献57-68
• 英汉缩略词对照表68-70
• 致谢70-71
• 综述 抗癌药物对多发性硬化治疗的研究进展71-86
• 参考文献80-86

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 何秀云;郝娟;肖漓;黄香玉;李静;陈红兵;高钰;赵雅贞;朱传智;;结核病人外周血T辅助细胞含量分析[J];军医进修学院学报;2012年08期

2 刘志华;齐青松;张志安;张晓静;;慢性HBV感染患者血清IL-35含量和外周血Treg细胞的变化及意义[J];海南医学;2014年11期

3 金妹娟;;胜利油田矿区苯作业工人白细胞含量观察[J];医学动物防制;2006年04期

4 范新妍;王仲君;;基于CD4细胞含量的AIDS病人免疫能力分析与疗效评估[J];中国卫生统计;2012年06期

5 邵晓冬;郭晓钟;王迪;邹德利;任丽楠;李宏宇;赵佳钧;;CD34~+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响[J];临床肝胆病杂志;2012年02期

6 ;[J];;年期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 何秀云;郝娟;肖漓;黄香玉;李静;陈红兵;高钰;赵雅贞;朱传智;;结核病人外周血Th细胞含量分析[A];2011年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 ;血液兴奋剂悄然肆虐[N];北京科技报;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 吕定超;心脏干细胞年龄、性别及部位分布特征研究[D];山西医科大学;2015年

2 张淑江;紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究[D];四川医科大学;2015年

3 陈光明;猪源乳酸菌抗感染益生特性的研究[D];内蒙古农业大学;2014年

  本文关键词：紫杉醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：332929