Nurr1基因对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响
发布时间：2017-05-03 01:05
本文关键词：Nurr1基因对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的：体外观察Nurr1基因过表达对SD大鼠中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化情况的影响。方法：1.通过全基因合成的方法克隆出大鼠Nurr1基因,通过限制性内切酶酶切后连接到质粒载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV上,经过转化、筛选和鉴定等步骤构建pCDH-Nurr1真核表达载体。2.取孕14天SD胎鼠的中脑组织,分离培养神经干细胞,在无血清培养基中筛选培养,取P2代神经干细胞进行其胚胎源性及分化潜能的免疫荧光鉴定。3.将培养的神经干细胞分成自然分化组、转染空质粒载体pCDH组、转染重组质粒载体pCDH-Nurr1组进行试验研究。应用Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光细胞化学的方法检测TH、DAT多巴胺能神经元特异性标记物的表达。结果：1.成功构建了SD大鼠重组质粒载体pCDH-Nurr1。2.从孕14天SD胎鼠的中脑组织分离出的神经干细胞能稳定增殖并连续传代,免疫荧光鉴定Nestin为阳性,细胞分化后鉴定GFAP也都呈阳性,证明培养的细胞是神经干细胞并具有分化能力。3.荧光显微镜下观察转染的情况,基因转染24h,pCDH转染组和重组质粒pCDH-Nurr1转染组的大多数细胞呈copGFP阳性表达,而自然分化组的细胞则无荧光蛋白表达。转染48h左右,荧光蛋白表达达到高峰,质粒pCDH转染组和pCDH-Nurr1转染组的转染效率分别为34.3%和36.5%,两组间无显著差异。4. Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光细胞化学的方法结果分析显示：TH、DAT的表达情况,自然分化组、pCDH组差别不大,pCDH-Nurr1转染组较自然分化组、pCDH组表达量明显升高。结论：Nurr1基因的过表达能够促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化,为进一步进行PD的体内细胞移植治疗提供了一定的理论依据。
【关键词】：Nurr1基因 神经干细胞 多巴胺能神经元 分化
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5
【目录】：
- 中文摘要6-8
- Abstract8-10
- 本文常用缩略词10-12
- 前言12-15
- 材料和方法15-29
- 一、材料15-19
- 1.实验动物及质粒载体15
- 2.主要仪器15-16
- 3.主要试剂16-17
- 4.主要试剂的配制17-19
- 二、方法19-29
- 第一部分 表达载体的构建19-23
- 1. PCR扩X椖康幕
本文编号：342021
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