神经降压素NTS及其受体NTSR1对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制

发布时间：2017-05-05 15:00

  本文关键词：神经降压素NTS及其受体NTSR1对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：恶性胶质瘤是具有高度侵袭性和致死性的颅内原发性肿瘤,约占成人颅内原发恶性肿瘤的80%。尽管近年来综合治疗策略(联合手术、放疗和化疗)在临床中的广泛运用并取得了一定效果,但多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)患者的中位生存期仍然少于15个月。恶性增殖是胶质瘤细胞的生物学特点之一,导胶质瘤细胞恶性增殖的重要原因是肿瘤细胞基因组的不稳定和功能基因组的异常表达。因此,深入探讨胶质细胞增殖和肿瘤生长的分子机制将有助于解释其恶性增殖现象。神经降压素(neurotensin,NTS)是由13个氨基酸残基组成的直链多肽,作为神经递质和激素样神经肽广泛分布并作用于中枢神经系统和消化系统。研究发现,神经降压素和高亲和力受体1(neurotensin receptor 1,NTSR1)在多种肿瘤的病理进程中发挥了重要作用。因此,NTS/NTSR1有望成为肿瘤治疗的潜在靶点,但目前尚无文献报道NTS/NTSR1在恶性胶质瘤中的生物学效应及其分子机制。微小RNA(micro RNAs,mi RNAs)是一类内源性、短链、高度保守的非编码RNA。mi RNAs和相应蛋白形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC),RISC作用于靶点mRNA的3端非转录区,以转录后调节方式抑制靶点mRNA翻译成蛋白质或降解该mRNA。生物信息学分析发现人体约有30%-60%基因的表达受到微小RNA的调控,其中包括众多细胞周期调控因子。本研究采用体外和体内实验观察NTS/NTSR1、mi RNAs和c-Myc对胶质瘤细胞增殖、细胞周期和移植瘤生长的影响;采用miRNAs芯片、荧光定量PCR和染色质免疫共沉淀(Ch IP)实验论证NTS/NTSR1如何调控miRNAs的表达;采用荧光素酶报告基因和正反论证法观察mi RNAs和CDKs之间的关联;采用western blot、荧光定量PCR和正反论证法探讨NTS/NTSR1如何调控CDK4的表达。旨在探讨NTS/NTSR1在胶质瘤细胞增殖中的生物学作用及其分子机制,为研究控制胶质瘤生长和改善患者预后提供实验依据和新的治疗靶点。主要结果:1.NTS/NTSR1促进胶质瘤细胞增殖、G1/S期进展和皮下移植瘤生长NTS在体外具有促进胶质瘤细胞增殖和G1/S期进展的能力,而使用NTSR1的特异性拮抗剂SR48692或si NTSR1可以显著逆转NTS对细胞增殖和细胞周期进展的促进作用;沉默胶质瘤细胞NTSR1的表达可以显著抑制皮下移植瘤的生长;NTS/NTSR1对胶质瘤细胞增殖的影响主要通过调控G1/S期进展而不是通过影响细胞凋亡;NTS/NTSR1对G1/S期进展的促进作用主要通过在转录后水平调节CDK6的表达,在转录水平调节CDK4表达来实现。2.NTS/NTSR1通过c-Myc/mi R-29b-1和miR-129-3p调节CDK6蛋白的表达NTS/NTSR1抑制胶质瘤细胞中mi R-29b-1和miR-129-3p的表达,这两个mi RNAs均可以作用于CDK6 mRNA的3端非转录区并抑制CDK6蛋白的表达;NTS/NTSR1通过促进转录因子c-Myc的表达继而作用于mi R-29b-1的启动子并抑制其表达。3.NTS/NTSR1通过转录因子c-Myc在转录水平促进CDK4的表达NTS促进胶质瘤细胞中转录因子c-Myc的表达,该过程需要NTSR1的参与;转录因子c-Myc通过和CDK4的启动子结合继而促进CDK4的转录表达。4.mi R-29b-1、mi R-129-3p和转录因子c-Myc影响胶质瘤细胞增殖、G1/S期进展、颅内原位移植瘤生长和荷瘤裸鼠生存时间mi R-29b-1和miR-129-3p抑制胶质瘤细胞增殖和G1/S期进展;在U87-NTSR1-SH细胞中干扰miR-29b-1和miR-129-3p的功能可以恢复颅内原位移植瘤的生长;在U87-NTSR1-SH细胞中过表达c-Myc或干扰mi RNAs的功能均可以促进胶质瘤细胞增殖和G1/S期进展,两者联合运用具有协同促进作用。综上所述,NTS/NTSR1可以在体外促进胶质瘤细胞增殖和G1/S期进展,在体内促进肿瘤组织的生长,而沉默NTSR1可以逆转上述现象;NTS/NTSR1通过抑制mi R-29b-1和mi R-129-3p表达继而解除这两个mi RNAs对CDK6蛋白表达的抑制作用;NTS/NTSR1通过促进c-Myc表达一方面抑制miR-29b-1的表达,另一方面促进CDK4的转录;NTS/NTSR促进胶质瘤细胞增殖、G1/S期进展和肿瘤生长需要miRNA/CDKs轴和c-Myc/CDKs轴的参与。
【关键词】：胶质母细胞瘤 神经降压素 微小RNA 细胞周期
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-18
• 1.1 选题缘由12-13
• 1.2 研究背景13-15
• 1.3 研究意义15
• 1.4 研究内容15-16
• 1.5 研究方法16-18
• 第二章 NTS/NTSR1促进胶质瘤细胞周期进展，细胞增殖和肿瘤生长18-40
• 2.1 材料和方法18-28
• 2.2 结果28-37
• 2.3 讨论37-39
• 2.4 小结39-40
• 第三章 NTS/NTSR1通过miRNA/CDKs和c-Myc/CDKs机制调控CDK4/6 的表达40-66
• 3.1 材料和方法41-53
• 3.2 结果53-63
• 3.3 讨论63-65
• 3.4 小结65-66
• 第四章 NTS/NTSR1-mi RNAs和NTS/NTSR1-Myc共同影响62胶质瘤细胞的增殖活力66-82
• 4.1 材料和方法66-74
• 4.2 结果74-80
• 4.3 讨论80-81
• 4.4 小结81-82
• 全文总结82-84
• 参考文献84-93
• 文献综述 micro RNAs调控恶性胶质瘤细胞周期的研究进展93-100
• 参考文献97-100
• 攻读学位期间的研究成果100-101
• 致谢101

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1 欧阳庆;神经降压素NTS及其受体NTSR1对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制[D];第三军医大学;2015年

  本文关键词：神经降压素NTS及其受体NTSR1对胶质瘤细胞增殖的影响及其分子机制，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：346531