HHV6、HPV16、HSV在局灶性皮质发育障碍中的表达

发布时间：2017-05-14 05:10

  本文关键词：HHV6、HPV16、HSV在局灶性皮质发育障碍中的表达，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景和目的:皮质发育障碍(malformations of cortical development,MCD)又称作皮质发育不良、皮质发育畸形[1]等,是一组局灶性或弥漫性皮质结构异常病变的总称[2]。常引起癫痫、发育迟缓、局部神经功能障碍和精神发育不全等多种临床表现。由于皮质组建异常,离子通道病变(channelopathies)等,常引起异常神经元电位形成,神经元兴奋-抑制失衡的兴奋毒性作用,是触发癫痫的重要病理生理机制。占癫痫病因的24%,占耐药性癫痫大约40%,是难治性癫痫的主要病因。局灶性皮质发育障碍(focal cortical dysplasia,FCD)是MCD的重要亚型之一,1971年由泰勒及其同事[3]首先发现并详细描述。FCD是难治性癫痫的重要病因,也是癫痫手术中最常见的皮质发育障碍类型[4]。FCD主要影响大脑皮质区域,以皮质分层异常和异形细胞为特点,并据此分为三型(FCDI,FCDII,FCDIII),其中,FCDII是最重要的亚型,出现特征性的异形神经元(FCDIIa)和气球样细胞(FCDIIb),与药物难治性癫痫关系尤为密切[4]。FCD作为难治性癫痫最重要的病因,其具体的形成机制仍不清楚。目前,有报道表明,哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白受体(mTOR)信号途径的破坏可导致FCD的异常组织结构。其他机制,比如胚胎期的基因突变及外部环境诱导的损伤(病毒感染,局部缺血或缺氧等)也被认为是诱导FCD的主要病因[5]。基因突变已经被临床样本及动物实验证实[5,6]。外部环境诱导的损伤,比如致畸性化学试剂,外伤等也已通过动物实验证实[6,7]。然而,病毒感染在FCD中的作用尚不清楚。已有大量研究显示,病毒感染及其诱发的炎症反应是癫痫发病的重要原因,病毒感染可引起临床癫痫发作,利用病毒感染可建立癫痫发作模型。同时,胚胎期病毒感染及其诱导的炎症反应尚可通过NF?B和mTOR等信号的激活,影响神经干细胞的增殖、迁移和分化,导致脑发育异常形成FCD。已经发现,胚胎期易感病毒,如单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV),人乳头瘤病毒16(Human papillomavirus16,HPV16),人疱疹病毒6(Human herpesvirus6,HHV6)在癫痫患者的脑组织中检出率也明显高于正常人,进一步支持胚胎期病毒感染可能是FCD形成和癫痫发生的重要原因,但病毒感染在临床fcd手术切除标本尚未证实。因此,本课题将检测胚胎期易感病毒在fcd的表达,探讨fcd癫痫和胚胎期易感病毒的相关关系,为临床上治疗fcd癫痫提供新的思路。方法:1.收集不同病人的脑组织切除标本(包括fcdiia、fcdiib以及对照)。2.提取上述病人脑组织dna,采用nested-pcr技术,检测标本中hsv1,hsv2,hhv6a,hhv6b,hpv16的感染情况。3.选取nested-pcr阳性结果作为实验组,以正常脑组织作为对照组,采用免疫组化、免疫荧光的方法验证nested-pcr的结果,并观察病毒感染的形态学分布。4.用westernblot进一步验证之前的实验结果。5.以上述结果中感染病毒的标本作为实验组提取rna,以无病毒感染的正常人大脑皮层提rna作为对照组。采用rt-pcr技术检测病毒感染后下游信号tlr3及trif的表达。结果:1.成功收集实验组(fcd组)标本37例,对照组标本22例。根据临床及病理分型结果,实验组中:fcdiia20例,fcdiib17例;对照组中:外伤8例、脑出血4例,其他肿瘤周围正常组织10例。2.nested-pcr检测hhv6a在fcd组的感染率为20/37(54.1%),其中,fcdiia感染率为9/20(45.0%),fcdiib感染率为11/17(64.7%),对照组感染率为2/22(9.1%)(与fcd组比较存在显著差异,p0.05);hhv6b在fcd组的感染率为25/37(67.6%),其中,fcdiia感染率为14/20(70.0%),fcdiib感染率为11/17(64.7%),对照组感染率为5/22(22.7%)(与fcd组比较存在显著差异,p0.05);基因测序、免疫组化和westernblot检测证实了hhv6a和hhv6b病毒及其表达产物的存在。3.nested-pcr检测hpv16在fcd组的感染率为18/37(48.6%),其中,fcdiia感染率为9/20(45.0%),fcdiib感染率为9/17(52.9%),对照组感染率为4/22(18.2%)(与fcd组比较存在显著差异,p0.05);免疫组化和westernblot检测证实了hpv16病毒表达产物的存在。4.nested-pcr检测hsv1在fcd组的感染率为33/37(89.2%),其中,fcdiia感染率为18/20(90.0%),fcdiib感染率为15/17(88.2%),对照组感染率为5/22(22.7%)(与fcd组比较存在显著差异,p0.05);hsv2在fcd组的感染率为30/37(81.1%),其中,fcdiia感染率为16/20(80.0%),fcdiib感染率为14/17(82.4%),对照组感染率为2/22(9.1%)(与FCD组比较存在显著差异,P0.05);免疫组化和Western Blot检测证实了上述HSV1和HSV2病毒表达产物的存在。5.在病毒感染阳性标本中,下游信号分子TLR3及TRIF的表达水平明显高于无病毒感染的对照组(TLR3:t=39.220,P=0.000;TRIF:t=22.226,p=0.000)。结论:1.HHV6A、HHV6B、HPV16、HSV1和HSV2在FCD组的感染率明显高于正常对照组,表明上述胚胎期易感病毒与FCD相关,可能是FCD形成和癫痫发生的重要原因。2.伴病毒感染的FCD标本存在明显的TLR3-TRIF炎症信号通路激活,提示FCD内存在病毒激活的炎症反应,可能是参与FCD癫痫的发病机制。
【关键词】：局灶性皮质发育障碍 人疱疹病毒6 人乳头瘤病毒16 单纯疱疹病毒 难治性癫痫
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.8
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 1. 前言12-14
• 2. 材料与方法14-30
• 3. 结果30-47
• 4. 讨论47-55
• 全文总结55-56
• 参考文献56-62
• 文献综述 炎症在癫痫中作用的研究现状62-76
• 参考文献67-76
• 研究生期间主要发表论文76-77
• 致谢77

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